本文關鍵詞：沉默DNA-PKcs、ATM表達對HeLa細胞生物學行為及放療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤,發(fā)病率在女性所有惡性腫瘤中居第4位,但是在部分發(fā)展中國家,由于宮頸癌篩查不到位,其發(fā)病率可以居女性惡性腫瘤首位。據(jù)統(tǒng)計全世界每年約有新發(fā)宮頸癌患者528,000例,因?qū)m頸癌導致的死亡約為266,000例,其中85%左右發(fā)生在發(fā)展中國家。宮頸癌是唯一明確病因的惡性腫瘤,持續(xù)的高危HPV感染是導致宮頸癌的原因,其中HPV16/18兩種病毒感染導致的宮頸癌占宮頸癌總數(shù)的80%左右。目前宮頸癌的治療主要包括手術、放療和化療。放療是宮頸癌的重要治療方法,特別對晚期宮頸癌患者。放射線能引起細胞DNA雙鏈斷裂(DSB),如果不能及時修復可導致細胞死亡。細胞中存在著對其存活至關重要的DNA損傷修復通路。腫瘤細胞對放療導致DNA損傷的修復能力是引起其對放療不敏感的重要原因。目前較為公認的DSB修復機制主要有兩種:非同源末端連接(NHEJ)修復和同源重組(HR)修復,哺乳動物細胞以NHEJ修復為主。DNA-PKcs和ATM分別在NHEJ和HR修復中起重要作用。臨床研究表明DNA-PKcs和ATM高表達的腫瘤患者疾病進展較快,對放療不敏感,預后較差。細胞實驗表明,通過RNA干擾抑制癌細胞DNA-PKcs或ATM的表達能增加其對放療的敏感性,并且對其部分惡性生物學行為有一定影響。但是還沒有研究同時抑制DNA-PKcs和ATM表達檢測其對宮頸癌細胞惡性生物學行為及放療敏感性的影響。研究目的探討抑制hela細胞dna-pkcs、atm的表達后,對其生物學行為及放療敏感性的影響。材料與方法1.構建干擾質(zhì)粒:將針對dna-pkcs和atm的干擾rna分別及同時連入質(zhì)粒,合成含針對dna-pkcs、atm及dna-pkcs+atm的干擾質(zhì)粒。2.篩選穩(wěn)定轉染的細胞株及檢測沉默效果:將干擾質(zhì)粒分別轉染hela細胞,嘌吟霉素篩選出穩(wěn)定轉染的細胞株。用westernblot和quantitativereal-timepcr檢測未轉染的hela細胞組(對照組),轉染干擾dna-pkcs表達hela細胞組(dna-pkcs組),轉染干擾atm表達hela細胞組(atm組)和轉染同時干擾dna-pkcs+atm表達hela細胞組(dna-pkcs+atm組)的dna-pkcs和atm蛋白和mrna表達水平,檢測沉默效果。3.cck8檢測對照組、單獨及同時沉默dna-pkcs、atm對hela細胞增殖活性的影響。4.流式細胞儀檢測對照組、單獨及同時沉默dna-pkcs、atm對hela細胞凋亡的影響。5.transwell小室侵襲模型檢測對照組、單獨及同時沉默dna-pkcs、atm對hela細胞侵襲能力的影響。6.克隆形成實驗檢測對照組、單獨及同時沉默dna-pkcs、atm對hela細胞放療敏感性的影響。7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析:數(shù)據(jù)采用spss17.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料均進行正態(tài)性、方差齊性檢驗,符合正態(tài)性條件的結果以均數(shù)±標準差(x±s)表示,各組間比較采用方差分析或者非參數(shù)檢驗,組間兩兩比較用snk(student-newman-keuls,snk)法。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側概率檢驗,p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果1.篩選穩(wěn)定轉染的細胞系及對沉默效果的檢測:使用含嘌呤霉素的梯度培養(yǎng)基培養(yǎng)2周,確定嘌呤霉素對hela細胞的最佳篩選濃度為0.8ug/ml。然后用此濃度的篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)轉染后的hela細胞,篩選出穩(wěn)定轉染的克隆。通過westernblot和quantitativereal-timepcr分別從蛋白水平和mrna水平檢測各組細胞中dna-pkcs和atm量的變化,結果顯示:dna-pkcs組和ATM+DNA-PKcs組的DNA-PKcs mRNA和蛋白水平均較其它組下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);ATM組和DNA-PKcs+ATM組ATM蛋白和mRNA均較其它組表達下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.細胞增殖實驗結果顯示:在24 h、48 h、72 h、96 h四個時間點,ATM+DNA-PKcs組增殖活性較對照組低,差異分別有統(tǒng)計學意義(P0.05);在48 h、72 h、96 h各個時間點時,ATM+DNA-PKcs組增殖活性較ATM組低,DNA-PKcs組較對照組增殖活性低,差異分別有統(tǒng)計學意義(P0.05);在72h、96 h各個時間點時,ATM+DNA-PKcs組較DNA-PKcs組增殖活性低,ATM組較對照組增殖活性低,差異均有統(tǒng)計學差異(P0.05);在96h時,DNA-PKcs組較ATM組增殖活性低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。余差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.細胞凋亡實驗結果顯示:ATM+DNA-PKcs組較DNA-PKcs組、ATM組及對照組凋亡增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);DNA-PKcs組較ATM組和對照組凋亡增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05),其余差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.Transwell小室侵襲實驗結果顯示:實驗組較對照組穿過基質(zhì)膠細胞數(shù)少,差異存在統(tǒng)計學意義(P0.05),其中ATM+DNA-PKcs組的穿過基質(zhì)膠細胞數(shù)最少;ATM+DNA-PKcs組較ATM組和DNA-PKcs組穿過基質(zhì)膠細胞數(shù)少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),其余則無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.放療敏感性實驗結果顯示:在2,4,6 Gy三個放射線劑量時,實驗組較對照組克隆形成率低,且ATM+DNA-PKcs組較DNA-PKcs組和ATM組克隆形成率低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);在6Gy時DNA-PKcs組較ATM組克隆形成率低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);余差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1.DNA-PKcs對HeLa細胞增殖、凋亡及放療敏感性的影響較ATM明顯。2.同時沉默宮頸癌HeLa細胞DNA-PKcs和ATM表達較單獨沉默DNA-PKcs或ATM,能更有效的增加HeLa細胞凋亡,抑制增殖和侵襲,特別是能明顯增加其放療敏感性。
【關鍵詞】：HeLa細胞 DNA-PKcs ATM 生物學行為 放療敏感性
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33;R730.55
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞12-14
• 引言14-18
• 材料與方法18-30
• 結果30-37
• 討論37-42
• 結論42-43
• 參考文獻43-48
• 綜述 RNAI與宮頸癌放療敏感性相關基因的研究進展48-60
• 參考文獻55-60
• 個人簡歷60-61
• 致謝61

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1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學學報;2000年04期

2 葛學銘,陸應麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2001年03期

6 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學院學報;2001年01期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉變——2011年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學術會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學學術年會暨生殖健康講習班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學會第十次全國婦產(chǎn)科學術會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學組、絕經(jīng)學組、計劃生育學組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學與生物力學學術會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第29屆學術年會暨首屆生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導全身炎癥反應綜合征的作用及其機制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結合方式中的DNA媒介電荷轉移[A];第十三次全國電化學會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學化工學會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟專家論壇論文集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領先”作為DNA[N];經(jīng)濟觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應用DNA技術一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學基礎醫(yī)學部生物化學與分子生物學教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

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1 唐陽;基于質(zhì)譜技術的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學;2014年

2 池晴佳;DNA動力學與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學;2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關鍵酶TET2的三維結構與P暬蒲芯縖D];復旦大學;2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴增的DNA自組裝技術的研究[D];南京大學;2014年

5 黃學鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復旦大學;2013年

6 隋江東;APE1促進DNA-PKcs介導hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

7 劉松柏;結構特異性核酸酶FEN1在DNA復制及細胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學;2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復中的作用及機制研究[D];東北師范大學;2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

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1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學;2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學;2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學;2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細胞肺癌根治術前后腫瘤負荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學;2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復合材料DNA生物傳感器的構建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學;2015年

7 李海青;轉堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結構特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學;2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學;2015年

  本文關鍵詞：沉默DNA-PKcs、ATM表達對HeLa細胞生物學行為及放療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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