目的:高分辨率熔解曲線(high-resolution melting,HRM)分析技術(shù)是一種利用DNA雜交與退火熔解特性進(jìn)行核酸分析的技術(shù),主要通過對DNA解離活動中熒光染料變化的監(jiān)控,實(shí)現(xiàn)突變的篩查和檢測。HRM分析技術(shù)不需要探針標(biāo)記,并且能夠在很大程度上減少測序的負(fù)擔(dān),具有特異性好、通量高、時間成本低、便于操作等優(yōu)點(diǎn)。HRM分析技術(shù)還是一種同質(zhì)閉管的檢測方法,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)與后續(xù)檢測均在同一孔內(nèi)完成,無需轉(zhuǎn)移樣品,能有效地減少交叉污染的可能性。近年來越來越多的專家學(xué)者嘗試將HRM分析技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)研究和相關(guān)案例中。本研究擬采用HRM分析方法,對微量或降解檢材進(jìn)行遺傳標(biāo)記分析,以期應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個體識別案件中。降解和低拷貝數(shù)(low-copy-number,LCN)的DNA樣品是法醫(yī)學(xué)相關(guān)案件中常見的檢材,具有一定程度的挑戰(zhàn)性,因?yàn)樗鼈冊黾恿藰悠诽幚淼碾y度,并降低了從DNA獲得遺傳信息的可能性。HRM分析技術(shù)可用于遺傳標(biāo)記的基因分型,且在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已被嘗試用于檢測LCN和降解的DNA。但是,基于HRM技術(shù)對降解和LCN ...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :HRM分析技術(shù)在ABO基因分型中的應(yīng)用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 基因組DNA分離和處理
            2.2.2 引物設(shè)計與HRM擴(kuò)增
            2.2.3 HRM分析進(jìn)行ABO基因分型
            2.2.4 多重PCR擴(kuò)增子熔解曲線分析
    3 結(jié)果
        3.1 應(yīng)用HRM技術(shù)成功對常見ABO基因型進(jìn)行分型
            3.1.1 子集1分型結(jié)果
            3.1.2 子集2分型結(jié)果
        3.2 應(yīng)用HRM技術(shù)成功對雙重PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因分型
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :HRM技術(shù)在微量和降解檢材基因分型中的應(yīng)用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 DNA樣品的制備和處理
            2.2.2 引物設(shè)計與HRM條件
            2.2.3 應(yīng)用HRM分析進(jìn)行基因分型
    3 結(jié)果
        3.1 HRM分析技術(shù)可對LCN DNA進(jìn)行基因分型
        3.2 HRM分析技術(shù)可對降解DNA進(jìn)行基因分型
        3.3 HRM分析技術(shù)可選擇性應(yīng)用于毛干DNA遺傳標(biāo)記的檢測
    4 討論
        4.1 HRM技術(shù)的特點(diǎn)與優(yōu)勢
        4.2 HRM技術(shù)的局限性
        4.3 HRM技術(shù)在LCN樣品與降解檢材中的應(yīng)用
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3742908