SOX4是胚胎發(fā)育過程中重要的轉錄因子,參與心臟、淋巴細胞、神經系統(tǒng)等多種器官的發(fā)育。在小鼠胚胎發(fā)生過程中SOX4蛋白質表達廣泛,但在成年小鼠體內SOX4蛋白質只表達在胸腺、骨髓和生殖腺中�，F(xiàn)有研究表明抗腫瘤藥物,如etoposide、前列腺素等可以上調SOX4蛋白質表達水平,干涉SOX4蛋白質后將抑制抗腫瘤藥物誘發(fā)細胞凋亡的功能。Etoposide、DOX等化學藥物作用本質是使腫瘤細胞發(fā)生DNA鏈斷裂,激活DNA損傷信號通路,使腫瘤細胞發(fā)生生長阻滯或是凋亡。本實驗目的是研究γ射線、DOX等DNA損傷誘變劑作用細胞后能否調控SOX4蛋白質表達水平;DNA損傷引起的SOX4蛋白質表達水平的變化是否具有生理意義。通過檢測γ射線等DNA損傷誘變劑刺激細胞后SOX4的蛋白質水平,以及轉錄水平的變化,明確了DNA損傷誘發(fā)SOX4蛋白質表達上調的現(xiàn)象,但這種變化不是發(fā)生在轉錄水平,提示有可能是蛋白質翻譯后修飾的變化使SOX4發(fā)生累積。為了確定DNA損傷誘導SOX4上調是否依賴于p53,選用HCT116以及HCT116 1953-/-細胞,檢測了γ射線照射后SOX4的蛋白質水平變化,實驗結果表明DN... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 SOX4單克隆抗體制備
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實驗方法
    結果與討論
        1.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表達載體菌液PCR鑒定
        2.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表達載體酶切鑒定
        3.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa小量誘導
        4.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa大量誘導
        5.GST-SOX4(130-344)aa蛋白質定量
        6.BALB/c小鼠GST-SOX4(130-344)aa抗原免疫效果檢測
        7.雜交瘤細胞篩選、亞克隆及大量生產結果
        8.通過western blot對SOX4單克隆抗體進行功能檢測
    小結
第二部分 DNA損傷誘導SOX4蛋白質上調
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實驗方法
    結果與討論
        1.各個細胞系中SOX4蛋白質表達
        2.γ射線誘導H460、HCT116細胞中SOX4蛋白質表達上調
        3.化學藥物引起HCT116、H460細胞中SOX4蛋白質表達上調
        4.DNA損傷誘變劑并不引起SOX4轉錄水平變化
        5.DNA損傷所引起的SOX4蛋白質水平變化不依賴于p53
    小結
第三部分 SOX4蛋白質在細胞DNA損傷反應中的功能初探
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實驗方法
    結果與討論
        1.檢測H460細胞SOX4干涉效果
        2.SOX4促進DNA損傷誘導的促凋亡因子BAX的表達
    小結
總結
參考文獻
附錄
發(fā)表文章
綜述
致謝



本文編號：3668610