目的:細胞內(nèi)的GSH含量對維持細胞內(nèi)環(huán)境的氧化還原狀態(tài),以及細胞的正常生理功能起著至關(guān)重要的作用,并且氧化還原狀態(tài)的變化可引起細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生改變。本研究通過觀察細胞內(nèi)ERK蛋白表達及其磷酸化改變對GSH合成的影響,以及受X線照射后淋巴母細胞的存活率和DNA損傷情況,來探討ERK蛋白對淋巴母細胞輻射敏感性的影響及其初步機制。方法:以人類淋巴母細胞TK6細胞為實驗對象,選擇自由基（Free Radical,FR）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）清除劑N-乙酰半胱氨酸（N-Acetyl Cysteine,NAC）、谷胱甘肽（Glutataione,GSH）的合成抑制劑丁硫氨酸亞砜亞胺（L-Buthionine-sulfoximine,BSO）和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）的特異性抑制劑PD98059三種試劑進行實驗。首先采用MTT法進行實驗藥物的濃度選擇,隨后以對數(shù)期生長的TK6細胞通過分組,經(jīng)過各種試劑預(yù)處理后,采用GSH試劑盒檢測細胞內(nèi)GSH和GS... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表及中英文對照
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 藥物及試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
        2.1.4 常用試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)與保株
        2.2.2 MTT實驗
        2.2.3 Western Blot檢測
        2.2.4 GSH/GSSG含量測定(標(biāo)準(zhǔn)曲線法)
        2.2.5 細胞活性實驗
        2.2.6 微核(micronucleus)分析
        2.2.7 照射條件
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 藥物的無毒濃度選擇
        3.1.1 BSO的無毒實驗濃度選擇
        3.1.2 PD98059的無毒實驗濃度選擇
    3.2 不同處理后TK6細胞內(nèi)ERK1/2 蛋白的表達變化
    3.3 不同處理后TK6細胞內(nèi)T-GSH、GSH以及GSSG含量的變化
        3.3.1 TK6細胞T-GSH和GSSG檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.3.2 不同處理后，TK6細胞內(nèi)T-GSH、GSH和GSSG的含量變化
    3.4 不同預(yù)處理后，受照射TK-6 細胞活性的變化
    3.5 不同預(yù)處理后，受照射TK6細胞的微核形成情況
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述 MAPK/ERK信號通路與細胞抗凋亡機制的研究進展
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3653361