目的:將編碼GGC肽（diglycylcysteine,雙甘氨酰半胱氨酸）的基因序列與人生長抑素2a型受體（hSSTr2a）基因的膜外N端開放閱讀框相連接,構建融合受體重組腺病毒載體Ad5-GGC-hSSTr2a-IRES-EGFP。通過體外受體結(jié)合試驗、細胞攝取試驗、核素報告基因顯像等一系列體外與體內(nèi)實驗研究,探討以GGC序列為報告基因進行核素報告基因顯像的可行性,以期建立一種新型的核素報告基因顯像系統(tǒng)。方法:1.重組腺病毒載體Ad5-GGC-hSSTr2a-IRES-EGFP的構建與表達鑒定。采用RT-PCR方法擴增hSSTr2a基因全長cDNA序列,將GGC肽的基因序列（親水序列P1,疏水序列P2）與hSSTr2a的膜外N端開放閱讀框相連接,通過一系列基因工程技術構建同源重組腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1/GGC-hSSTr2a-IRES-EGFP （pAd-SIG-P1, P2）。提取pAd-SIG-P1和pAd-SIG-P2質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞,酶切線性化后經(jīng)脂質(zhì)體（Lipofectamine2000）介導轉(zhuǎn)染HEK293細胞,同源重組產(chǎn)生融合受體重組腺病毒... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
    中文摘要
    英文摘要
前言
    參考文獻
正文
    第一部分 Ad5-GGC-hSST12a-IRES-EGFP 重組腺病毒的構建與表達鑒定
        摘要
        Abstract
        材料和方法
        結(jié)果
        討論
        參考文獻
    第二部分 Ad5-GGC-hSST12a-IRES-EGFP 重組腺病毒在MCF-7細胞內(nèi)的表達
        摘要
        Abstract
        材料和方法
        結(jié)果
        討論
        參考文獻
    第三部分 Ad5-GGC-hSST12a-IRES-EGFP 在荷瘤裸鼠體內(nèi)的報告基因顯像
        摘要
        Abstract
        材料和方法
        結(jié)果
        討論
        參考文獻
全文總結(jié)
附錄
    附錄一 英文縮寫注釋表
    附錄二 攻讀博士學位期間發(fā)表論文及申請課題
致謝



本文編號：3529157