研究99mTc標(biāo)記穿膜肽HIV-Tat49-57修飾的Caspase-3底物多肽Tat49-57-DEVD的制備方法；及其體外人乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡凋亡模型中標(biāo)記物攝取動力學(xué)實驗；以及在正常昆明小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布特征；并進(jìn)一步結(jié)合單光子發(fā)射計算機斷層（SPECT）顯像技術(shù),評價其應(yīng)用于在荷瘤裸鼠模型活體內(nèi)實時、動態(tài)地檢測靶組織細(xì)胞凋亡程度的可行性研究。方法1.99mTc-HYNIC-HIV-Tat-DEVD標(biāo)記條件和生物分布的研究：（1）多肽探針標(biāo)記條件的研究：合成穿膜肽HIV-Tat49-57修飾的Caspase-3底物多肽Tat49-57-DEVD,以雙功能聯(lián)結(jié)劑聯(lián)肼尼克酰胺（HYNIC）為螯合劑,采用間接標(biāo)記法,三羥甲基甘氨酸（tricine）與乙二胺二乙酸（EDDA）作為協(xié)同配體,99mTc標(biāo)記后經(jīng)Sep-PakC18反相層析柱進(jìn)行純化后,并對其標(biāo)記率、放化純、穩(wěn)定性進(jìn)行研究。（2）正常小鼠體內(nèi)生物學(xué)分布研究：正常昆明小鼠25只,隨機分為5組,分別于尾靜脈注射99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD,每只動物注入標(biāo)記物7.4MBq,注射后... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

三種不同的凋亡途徑，最終均可使capaso3激活活

casPase一3不斷重復(fù)切割形成親水性產(chǎn)物，并“陷入”細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生放射性信號放大，從而可獲得更高的靶/非靶顯像比值，具有更好的理化、生物學(xué)性能及高質(zhì)量圖像(見圖2)。因此，在本實驗研究中根據(jù)Caspase一3底物的共有結(jié)構(gòu)特點，設(shè)計及篩選CasPase一3能特異性識別的小分子肚，并通過化學(xué)修飾、與穿膜膚 HlvTat49一5:連接，再通過以HYNIc作為雙功能鰲合劑首次采用放射性核素”gmTc對穿膜膚Hlv-Tat49_57修飾的easpase一3底物多膚(多膚序列為RKKRRQRRRDEVD，簡稱為Tat49一57一DEVD)進(jìn)行間接標(biāo)記方法的摸索;同時對標(biāo)記物進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞凋亡模型攝取動力學(xué)以及其在正常昆明小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布特征的研究;并進(jìn)一步探討了結(jié)合單光子發(fā)射式計算機斷層(SPECT)顯像技術(shù)，評價其應(yīng)用于在荷瘤裸鼠模型活體內(nèi)實時、動態(tài)地檢測靶組織細(xì)胞凋亡程度的可行性研究。實驗結(jié)果顯示標(biāo)記物的標(biāo)記率高，體外穩(wěn)定性好;標(biāo)記物在人乳腺癌細(xì)胞株MCF一7細(xì)胞凋亡模型中的細(xì)胞攝取具有特異性

HYNIC一RKKRRQRRRDEvn的HPLe結(jié)果


本文編號：3448072