本文關(guān)鍵詞：一次性力竭運(yùn)動(dòng)對(duì)Parkin介導(dǎo)的小鼠骨骼肌細(xì)胞抗凋亡通路的時(shí)相性影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)胞調(diào)亡(apoptosis)在個(gè)體生物的發(fā)育過(guò)程中至關(guān)重要,細(xì)胞凋亡過(guò)程受一系列基因的調(diào)控,當(dāng)受到內(nèi)源性或者外源性細(xì)胞凋亡信號(hào)的刺激時(shí)而啟動(dòng)的一種程序性細(xì)胞死亡方式,是個(gè)體組織細(xì)胞中最重要的細(xì)胞死亡途徑。細(xì)胞凋亡將受到損傷的細(xì)胞或者老化的細(xì)胞從體內(nèi)清除,對(duì)維持個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)有著非常重要的作用。同時(shí)細(xì)胞凋亡與許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)。比如亨廷頓氏舞蹈癥(Huntington's disease, HD)以及阿爾滋海默癥(Alzheimer's disease, AD)這兩種神經(jīng)退行性疾病與細(xì)胞凋亡有著密切的關(guān)系；再比如,病毒感染過(guò)程以及有毒物質(zhì)侵害體內(nèi)引起的細(xì)胞死亡均與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。另外,癌癥與細(xì)胞凋亡也密不可分,癌癥的發(fā)生主要是由于癌細(xì)胞的凋亡受到阻礙。目前所知的細(xì)胞凋亡通路大致有三條,其一：線(xiàn)粒體通路細(xì)胞凋亡,是最主要的凋亡途徑且被研究的最多因而調(diào)控機(jī)制較為明朗,線(xiàn)粒體細(xì)胞凋亡通路通常在細(xì)胞內(nèi)部損傷或應(yīng)激情況下被激活,促調(diào)亡因子(如細(xì)胞色素C, SMAC, Endo G, AIF等)繼而從線(xiàn)粒體中釋放,然后激發(fā)了caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；其二：死亡受體通路細(xì)胞凋亡；其三：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路細(xì)胞凋亡。上述三種細(xì)胞凋亡途徑并非彼此孤立,它們?cè)谀承顩r下相互聯(lián)系構(gòu)成更為復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。除凋亡通路外,抗凋亡通路也在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。研究人員新近發(fā)現(xiàn)了一條可能介導(dǎo)抗細(xì)胞凋亡的新通路：Parkin-NEMO-NF-κB-OPAl。這一通路屬于線(xiàn)粒體通路細(xì)胞凋亡途徑。最新的報(bào)道顯示,Parkin通過(guò)泛素化途徑,將NF-κB通路及細(xì)胞凋亡聯(lián)系在一起。即藥物應(yīng)激可以刺激組織通過(guò)Parkin-NEMO-NF-κB-OPAl通路保護(hù)性抗凋亡。目的：本研究擬通過(guò)建立一次性力竭運(yùn)動(dòng)及恢復(fù)期的時(shí)相模型,檢測(cè)]Parkin介導(dǎo)抗凋亡通路中關(guān)鍵基因和蛋白表達(dá)的時(shí)相性變化,以及對(duì)整個(gè)通路的作用機(jī)理,從而進(jìn)一步闡述運(yùn)動(dòng),尤其是一次性運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。方法：雄性四周齡C57/BL6小鼠56只,隨機(jī)分為7組,每組8只,包括：安靜對(duì)照組(C)、運(yùn)動(dòng)后即刻處死組(E0)、運(yùn)動(dòng)后2h處死組(E2)、運(yùn)動(dòng)后6h處死組(E6)、運(yùn)動(dòng)后12h處死組(E12)、運(yùn)動(dòng)后24h處死組(E24)和運(yùn)動(dòng)后48h處死組(E48)。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,運(yùn)動(dòng)組在水深50cm,水溫(30±2)℃的水槽中進(jìn)行一次性力竭游泳,終止時(shí)間以小鼠沉入水中10s不能自行浮起為標(biāo)準(zhǔn)。運(yùn)動(dòng)組分別于運(yùn)動(dòng)結(jié)束后0h、2h、6h、12h、24h和48h斷頸處死,迅速取下雙側(cè)腓腸肌,并應(yīng)用RT-PCR法、Western Bolt法檢測(cè)相關(guān)mRNA和蛋白表達(dá)水平,以及應(yīng)用JC-1試劑盒檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位從而反應(yīng)細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果：一次性力竭游泳后,Parkin的mRNA表達(dá)在E6、E24和E48有顯著性下降(p0.05),在E12有非常顯著性下降(p0.01)。IκBα的mRNA表達(dá)在E2、E6有顯著性上升(p0.05),在E0和E12有非常顯著性上升(p0.01)。與C組相比較,NEMO、P50、P65以及OPA1的1nRNA表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一次性力竭游泳后,Parkin的蛋白表達(dá)在即刻E0有非常顯著性上升,在E2和E6有顯著性上升(p0.05)。P-IκB的蛋白表達(dá)在E0有顯著性上升(p0.05),在E2有非常顯著性上升(p0.01)。與此相反,IκBα的蛋白表達(dá)在E6、E12、E24和E48有顯著性的下降(p0.05),通過(guò)計(jì)算P-IκB/IκBα的比值可知,一次性力竭游泳后P-IκB/IκBα的比值顯著性下降(p0.05)。一次性力竭游泳后OPA1的蛋白表達(dá)在E0、E6、E12和E24有顯著性的上升(p0.05)。一次性力竭游泳后,Cyt C的mRNA表達(dá)在E0有顯著性下降(p0.05),在E12、E24和E48有非常顯著性下降(p0.01)。CASP3的]mRNA表達(dá)在E0、E2、E6、E12和E48有顯著的下降(p0.05),在E24有非常顯著性下降(p0.01)。CASP6的mRNA表達(dá)E0、E2、E12、E24和E48有非常顯著性下降(p0.01)。CASP9的mRNA表達(dá)E0、 E2、E12、E24和E48有非常顯著性下降(p0.01)。另外,JC-1試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示,一次性力竭游泳后,小鼠骨骼肌線(xiàn)粒體膜電位E0、E2、E6、E12、E24和E48均有顯著性的降低(p0.05)。結(jié)論：1)一次性力竭游泳后骨骼肌發(fā)生明顯的細(xì)胞凋亡。凋亡持續(xù)時(shí)間達(dá)到48小時(shí)。2)一次性力竭運(yùn)動(dòng)可以有效的降低骨骼肌細(xì)胞凋亡因子Caspase3、 Caspase6、Caspase9、Cyt C的敏感性。3)一次性力竭游泳即刻啟動(dòng)Parkin介導(dǎo)的抗凋亡通路,但是不完全遵照既定的通路基因逐一發(fā)生。同時(shí),mRNA檢測(cè)結(jié)果與蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果不完全一致。
【關(guān)鍵詞】：一次性力竭游泳 細(xì)胞凋亡 Parkin NF-κB OPA1
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R87
【目錄】：

• 論文摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述13-34
• 1 細(xì)胞凋亡13-23
• 1.1 細(xì)胞凋亡概述13-14
• 1.2 細(xì)胞凋亡的經(jīng)典通路14-23
• 1.3 細(xì)胞凋亡的新通路23
• 2 信號(hào)通路調(diào)節(jié)蛋白23-30
• 2.1 Parkin23-25
• 2.2 NEMO25
• 2.3 NF-κB25-28
• 2.4 OPA128-30
• 3 Parkin介導(dǎo)的抗凋亡信號(hào)通路30-32
• 3.1 Parkin的應(yīng)激保護(hù)活化依賴(lài)于NEMO30
• 3.2 Parkin通過(guò)NEMO依賴(lài)性方式誘導(dǎo)OPA1表達(dá)增加30-31
• 3.3 NEMO通過(guò)NF-κB作用于OPA131
• 3.4 Parkin通過(guò)LUBAC增加NEMO的線(xiàn)性泛素化31-32
• 4 運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞凋亡32-34
• 4.1 運(yùn)動(dòng)與Parkin/NF-κB/OPA132-33
• 4.2 運(yùn)動(dòng)與Parkin介導(dǎo)的抗凋亡通路33-34
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)部分34-64
• 1 前言34
• 2 材料與方案34-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物34
• 2.2 動(dòng)物分組與實(shí)驗(yàn)方案34-35
• 2.3 動(dòng)物處死及取材35
• 2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑35-36
• 2.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器36-37
• 2.6 指標(biāo)測(cè)試37-43
• 2.7 數(shù)據(jù)處理43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-54
• 3.1 一次性力竭游泳對(duì)Parkin介導(dǎo)的抗凋亡通路的影響43-50
• 3.2 一次性力竭游泳對(duì)細(xì)胞凋亡的影響50-54
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析54-63
• 4.1 一次性力竭游泳對(duì)Parkin介導(dǎo)的抗凋亡通路的影響54-59
• 4.2 一次性力竭游泳對(duì)細(xì)胞凋亡的影響59-63
• 5 小結(jié)63-64
• 附錄1 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒64-66
• 附錄2 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)66-68
• 參考文獻(xiàn)68-77
• 后記77

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5 史s，

本文編號(hào)：337411