【摘要】：目的:探討小鼠腦部受照后,外泌體中的mi R-7通過靶基因Bcl-2調(diào)節(jié)肺部細胞自噬的機制,為進一步探討腫瘤患者行放療后正常組織產(chǎn)生的可能損傷及損傷防護提供依據(jù)。方法:1.免疫組化法、Western Blot法檢測肺組織中Cleaved caspase-3、Beclin-1、LC 3B、Bcl-2等相關蛋白的表達。2.實時熒光定量PCR檢測小鼠腦組織、肺組織、血液、星形膠質(zhì)細胞等樣本中的mi R-7、m RNA Bcl-2的表達水平。3.構(gòu)建了含Bcl-2-3'UTR野生型及突變型的報告基因質(zhì)粒,雙熒光素酶活性實驗驗證Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。4.超高速梯度離心法提取細胞培養(yǎng)基中的外泌體。5.Di I染料對外泌體進行染色,并加入到正常星形膠質(zhì)細胞原代細胞培養(yǎng)基中,共聚焦觀察外泌體進入細胞情況。結(jié)果:1.小鼠腦部照射后,肺部組織中Beclin-1、LC 3BⅡ/Ⅰ蛋白表達量顯著增加Cleaved caspase-3蛋白表達量無顯著變化。2.小鼠腦部受照后,肺組織mi R-7表達水平較正常小鼠肺部組織高,mRNA Bcl-2表達水平與mi R-7趨勢相反,且肺部組織Bcl-2蛋白表達水平較對照組降低。3.雙熒光素酶活性實驗發(fā)現(xiàn),mi R-7可顯著抑制Bcl-2-3'UTR野生型報告基因質(zhì)粒的熒光素酶活性而對突變型無顯著影響,證實Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。4.用照射后星膠細胞分泌的外泌體(rad-exo)處理正常星膠細胞后,其mi R-7表達水平顯著高于未照射星膠細胞分泌的外泌體(nc-exo)處理的星膠細胞,m RNA Bcl-2顯著降低。同時處理組細胞LC 3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1蛋白表達水平高于對照組,Bcl-2蛋白表達水平則降低。通過尾靜脈注射外泌體至小鼠體內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)rad-exo組mi R-7表達水平顯著高于nc-exo組,m RNA Bcl-2水平顯著降低,LC 3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1蛋白則顯著性升高。結(jié)論:1.Bcl-2是mi R-7的直接靶基因。2.Exosome/mi R-7通過調(diào)節(jié)Bcl-2介導了腦部受照后肺部出現(xiàn)的遠位旁觀者效應。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55

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本文編號：2733771