【摘要】：研究背景和目的:軍事訓(xùn)練期間發(fā)生的人員在封閉環(huán)境暴露于高濃度發(fā)煙罐煙霧(HC煙霧)導(dǎo)致吸入性損傷事件會(huì)造成嚴(yán)重人員傷亡,既往認(rèn)為吸入性肺損傷機(jī)制一直被是非特異性的,治療方案也一直僅僅限于對(duì)癥治療。明確吸入性毒氣損傷機(jī)制,尋找新治療方案一直是近期研究的重點(diǎn)。本研究的目的是利用大鼠模型揭示發(fā)煙罐煙霧吸入所致肺損傷的潛在機(jī)制。研究方法:本研究建立發(fā)煙罐煙霧吸入性損傷的動(dòng)物模型,自主研發(fā)可測定煙霧成分及濃度的煙箱,制作模擬發(fā)煙罐,確定大鼠模型染毒劑量,測定發(fā)煙罐煙霧中鋅離子濃度,大鼠肺進(jìn)行HE及Mallory染色,大鼠血清行生化檢測。以iTRAQ和加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析WGCNA來鑒別吸入煙霧1天、2天、7天和14天重要的大鼠肺差異蛋白,并進(jìn)行GO和KEGG途徑分析研究了差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)功能。同時(shí)分析了吸入煙霧后肺損傷早期(dl天和d2天)和中晚期(d7和d14天)的差異表達(dá)蛋白,進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用(PPI)分析。最后通過免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡分析對(duì)損傷修復(fù)相關(guān)蛋白PARK7、FABP5和Galectin-7進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)大鼠及患者進(jìn)行PARK7 BALF和血清ELISA檢測。主要結(jié)果及結(jié)論:大鼠死亡率與煙霧鋅離子濃度明顯相關(guān)。大鼠肺部病理研究發(fā)現(xiàn)染毒后早期肺組織出現(xiàn)充血、水腫、肺泡結(jié)構(gòu)破壞等病理變化,中后期出現(xiàn)肺氣腫及肺纖維化,染毒早期生化指標(biāo)明顯升高。吸入煙霧后第1、2、7和14天,總計(jì)共獲得27種不同表達(dá)蛋白。WGCNA結(jié)果表明,寶藍(lán)色模塊(涉及909個(gè)蛋白質(zhì))與煙霧吸入時(shí)間最相關(guān)。在肺損傷修復(fù)的早期階段,分別鑒定了 My13,Ckm,Adrml和 Igfbp7。在肺損傷修復(fù)中晚期鑒定 Gapdh,Acly,Tnni2,Actal,Actn3,Pygm,Eno3 and Tpil及糖酵解/糖異生信號(hào)通路。根據(jù)目前研究熱點(diǎn)發(fā)掘組學(xué)數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)持續(xù)下調(diào)的鋅離子通道TRPM7,及可能參與鋅離子轉(zhuǎn)運(yùn)的溶質(zhì)載體Slc25a51等蛋白在HC煙霧肺損傷起重要作用。對(duì)肺損傷修復(fù)關(guān)鍵蛋白檢索分析,從55個(gè)hub蛋白中篩選出3個(gè)蛋白:Galectin-7、PARK7及FABP5進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)大鼠肺組織進(jìn)行了免疫組化及WB再次驗(yàn)證。Galectin-7 WB為陰性。FABP5的WB與蛋白質(zhì)組學(xué)分析一致,FABP5免疫組化結(jié)果為陰性。PARK7的免疫組化、WB與iTRAQ定量表達(dá)均一致。ELISA檢測發(fā)現(xiàn)大鼠及人,HC煙霧暴露后d1、2天BALF的PARK7水平明顯增高,后期逐漸下降至正常。大鼠和中重度患者血清PARK7指標(biāo)在7天內(nèi)急性期均下降。而人輕度損傷組急性期血清PARK7水平是上升。說明PARK7不僅參與損傷修復(fù),還可作為反應(yīng)吸入性損傷嚴(yán)重程度的生物學(xué)標(biāo)志物。
【圖文】：

解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文逡逑預(yù)測氯化鋅煙霧吸入損傷嚴(yán)重程度［２６］，，但近２０年無基氯化鋅煙霧毒理機(jī)制，我們以高劑量氯化鋅煙霧染毒大鼠。逡逑料與方法逡逑煙霧箱模型建立：因所有重癥患者均在封閉環(huán)境內(nèi)高濃度境，本實(shí)驗(yàn)自制靜態(tài)發(fā)煙罐煙霧箱，箱體為長方體：長ｌ積０．４８邋ｍ３，在頂部放置排風(fēng)扇，便于染毒結(jié)束后盡快散性地接通的氣體接口，連接氣體采樣儀，將氣體樣本轉(zhuǎn)化霧中不同成分物質(zhì)的性質(zhì)和濃度。箱體內(nèi)放置模擬發(fā)煙罐。逡逑

圖３煙霧鋅離子濃度與大鼠死亡率相關(guān)逡逑吸入煙霧后大鼠各時(shí)間點(diǎn)病理改變逡逑大鼠吸入損傷后肺早期改變即Ｄｌ、Ｄ２主要以肺泡腔出血、肺間質(zhì)水腫、、泡、煙霧顆粒氣管沉著為主。９．９模擬罐較５．０ｇ模擬罐損傷更
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R82

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本文編號(hào)：2670408