【摘要】：目的:探討半月板碎片來源間充質(zhì)干細胞(MSC)樣細胞的分離培養(yǎng)和多向分化潛能。方法:通過酶消化的方法分離半月板碎片來源細胞,體外培養(yǎng)至第3代,顯微鏡下觀察其形態(tài)和生長狀態(tài)。取第3代細胞并對其進行向成骨、成脂和成軟骨誘導分化。結(jié)果:經(jīng)酶消化的方法分離半月板碎片來源細胞4~6天可見少量的長梭形貼壁,10~14天細胞成簇生長,克隆集落形成。第3代細胞形態(tài)較均一,生長增殖良好。成骨誘導14天后ALP和茜素紅染色陽性,有礦化結(jié)節(jié)形成。成脂誘導14天后油紅O染色陽性提示細胞內(nèi)有脂滴形成。采用細胞微團無血清成軟骨誘導21天后甲苯胺藍染色呈陽性,細胞外有蛋白多糖形成;免疫組織化學染色示特異軟骨基質(zhì)Ⅱ型膠原表達陽性。結(jié)論:采用混合膠原酶消化的方法分離獲得的半月板碎片來源的細胞貼壁生長,呈典型的長梭形的MSC樣細胞形態(tài),在體外適當?shù)恼T導條件下具有分化成骨、成脂、成軟骨的潛能,有望成為半月板再生的種子細胞來源。
[Abstract]:Aim: to investigate the isolation, culture and multidirectional differentiation potential of (MSC)-like cells derived from meniscus fragments. Methods: the cells from meniscus fragments were isolated by enzyme digestion and cultured to the third generation in vitro. the morphology and growth state of meniscus fragments were observed under microscope. The third passage cells were taken and induced to osteogenic, adipogenic and cartilage-forming. Results: a small amount of long fusiform adherent cells were isolated from meniscus fragments by enzyme digestion for 6 days, and the cells grew in clusters at 10 to 14 days, and clone colonies were formed. The morphology of the third passage cells was uniform and the growth and proliferation of the cells were good. After 14 days of osteogenic induction, ALP and alizalin red staining were positive and mineralization nodules were formed. After 14 days of adipogenic induction, the positive staining of oil red O suggested the formation of lipid droplets in the cells. After 21 days of induction with serum-free cartilage formation, toluene blue staining was positive and proteoglycan was formed outside the cells, and the expression of type II collagen in specific cartilage matrix was positive by immunohistochemical staining. Conclusion: the cells from meniscus fragments isolated by mixed collagenase digestion showed typical long fusiform MSC-like cell morphology and differentiated into bone and fat under appropriate induction conditions in vitro. The potential of cartilage formation is expected to be a source of seed cells for meniscus regeneration.
【作者單位】： 四川大學華西醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學基金(81301560) 中國博士后科學基金(2012M521698)
【分類號】：R87

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3 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細胞研究又見新方法[N];健康報;2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學院健康科學研究所 曹楷;間充質(zhì)干細胞：干細胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�;2014年

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6 記者　陳建強;首家間充質(zhì)干細胞庫在津建成[N];光明日報;2006年

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9 實習生 劉霞;間充質(zhì)干細胞有望用于面部整形[N];科技日報;2007年

10 馮國梧;全球首個臍帶間充質(zhì)干細胞庫規(guī)�；\營[N];科技日報;2008年

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2 鄭宗梅;脂肪間充質(zhì)干細胞作為骨組織工程種子細胞的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

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本文編號：2478644