本文選題：法醫(yī)遺傳學(xué) + 短串聯(lián)重復(fù)序列��； 參考：《法醫(yī)學(xué)雜志》2016年01期

【摘要】：目的建立一套15重快速STR復(fù)合擴(kuò)增體系。方法選擇14個(gè)常染色體基因座以及1個(gè)性別基因座,采用Fast Start Taq DNA聚合酶系統(tǒng),以DNA標(biāo)準(zhǔn)品9947A為模板,通過篩選擴(kuò)增條件、選擇熱啟動(dòng)酶用量、調(diào)整引物平衡、優(yōu)化快速擴(kuò)增程序、篩選反應(yīng)緩沖液、選擇反應(yīng)體系以及篩選添加劑等一系列復(fù)合擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),比較各條件下等位基因丟失和非特異性擴(kuò)增情況。結(jié)果在以1 ng DNA為模板、0.4μL聚合酶及10×Fast Start高保真反應(yīng)緩沖液構(gòu)成10μL快速體系的條件下,32 min即可獲得標(biāo)準(zhǔn)DNA全部15個(gè)STR基因座的完整分型,無等位基因丟失和非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象,等位基因均衡性良好。同時(shí),5%甘油、0.01%明膠、0.05%明膠和5 mmol/L硫酸銨可作為PCR擴(kuò)增過程中擬加入的反應(yīng)添加劑。結(jié)論本研究建立的15重快速STR復(fù)合擴(kuò)增體系可以明顯縮短反應(yīng)時(shí)間,提高樣品檢測(cè)效率。
[Abstract]:Objective to establish a 15-fold rapid STR multiplex amplification system. Methods 14 autosomal loci and 1 sex locus were selected. Fast start Taq DNA polymerase system was used, DNA standard strain 9947A was used as template, the amount of hot priming enzyme was selected and primer balance was adjusted by screening amplification conditions. A series of multiplex amplification experiments such as optimization of rapid amplification program, screening of reaction buffer, selection of reaction system and screening of additives were carried out to compare the allele loss and non-specific amplification under different conditions. Results the complete typing of all 15 STR loci of standard DNA could be obtained by using 1 ng DNA as template, 0.4 渭 L polymerase and 10 脳 Fast start high fidelity reaction buffer as 10 渭 L rapid reaction system. There was no allelic loss or nonspecific amplification. Allele equilibrium was good. At the same time, 5% glycerol, 0. 01% gelatin, 0. 05% gelatin and 5 mmol / L ammonium sulfate can be used as additives in PCR amplification. Conclusion the 15-step rapid STR multiplex amplification system can significantly shorten the reaction time and improve the detection efficiency.
【作者單位】： 中國(guó)人民公安大學(xué)刑事科學(xué)技術(shù)學(xué)院;公安部物證鑒定中心北京市現(xiàn)場(chǎng)物證檢驗(yàn)工程技術(shù)研究中心;公安部物證鑒定中心法醫(yī)遺傳學(xué)公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;清華大學(xué)醫(yī)學(xué)系統(tǒng)生物學(xué)研究中心;
【基金】：中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金計(jì)劃(2012JB012) 公安部技術(shù)研究計(jì)劃(2014JSYJA011)
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2096460