本文關(guān)鍵詞：人源甲狀腺髓樣癌噬菌體抗體庫的構(gòu)建及初步鑒定

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【摘要】：目的：應(yīng)用噬菌體抗體展示技術(shù),構(gòu)建大容量天然人源甲狀腺髓樣癌噬菌體單鏈抗體庫。 方法：提取甲狀腺髓樣癌病人癌周淋巴結(jié)總RNA,通過RT-PCR方法獲得抗體可變區(qū)基因VH和VL基因片斷，以它們?yōu)槟０宸謩e擴增VH-Linker和VL-Linker，再用SOE-PCR技術(shù)將之拼接組裝成scFv基因片段后引入酶切位點sfiI和NotI。將scFv基因克隆入噬菌粒栽體pCANTAB-5E后經(jīng)電轉(zhuǎn)入大腸桿菌Ecoli TG1，，之后經(jīng)輔助噬菌體M13K07超感染，構(gòu)建人源甲狀腺髓樣癌噬菌體單鏈抗體庫。PCR鑒定scFv片段陽性插入率，1.0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定陽性克隆雙酶切產(chǎn)物。 結(jié)果：甲狀腺髓樣癌周圍淋巴結(jié)總RNA的瓊脂糖電泳結(jié)果可見清晰的28S、18S條帶；VH基因的大小約為370bp，VL基因為350bp，組裝后的scFv基因約為750bp。用pUC19標準質(zhì)粒測定轉(zhuǎn)化效率達到108cfu/μg，scFv的陽性插入率為87.5％(21/24)。結(jié)論：成功地構(gòu)建了人源甲狀腺髓樣癌噬菌體展示文庫，為進一步篩選具有甲狀腺髓樣癌細胞特異性的人源噬菌體單鏈抗體奠定了實驗基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R736.1;R730.44

【參考文獻】

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本文編號：1157357