發(fā)布時間：2017-08-21 11:42

  本文關(guān)鍵詞：毛細管電泳免疫分析法檢測諾氟沙星獸藥殘留

  更多相關(guān)文章： 諾氟沙星 毛細管電泳 競爭性免疫 激光誘導熒光檢測器

【摘要】：農(nóng)獸藥殘留是影響食品安全的主要因素之一,建立快速有效的檢測分析方法對食品品質(zhì)監(jiān)管具有十分重要的意義。諾氟沙星是一類人畜共用的合成抗生素,屬于第三代氟喹諾酮類藥物,臨床上廣泛用于治療消化系統(tǒng)紊亂和泌尿生殖感染等癥狀。如果長期食用諾氟沙星殘留過量的食品,通過食物鏈的蓄積作用,不僅會紊亂人體內(nèi)分泌系統(tǒng),甚至還會造成體內(nèi)細菌耐藥性增強,影響藥物的治療效果。毛細管電泳免疫分析技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種新型分析技術(shù),它將電泳法的高分離效率和免疫法的高靈敏度結(jié)合起來。由于具有高通量、樣品處理簡單、耗樣量少等突出優(yōu)點,此法廣泛應用于醫(yī)藥、食品和化工等分析應用領(lǐng)域。 本研究將毛細管電泳免疫法應用于諾氟沙星檢測,建立了諾氟沙星毛細管電泳免疫分析聯(lián)用激光誘導熒光檢測器的檢測方法。本方法基于熒光標記諾氟沙星和諾氟沙星標準品競爭結(jié)合少量氟喹諾酮類多克隆抗體,通過檢測器檢測,產(chǎn)生游離的諾氟沙星和抗原抗體免疫復合物兩個峰,峰面積會隨著諾氟沙星標準品的濃度變化而相應改變,因而能對諾氟沙星定性定量分析。實驗中合成出熒光標記物,同時優(yōu)化了影響毛細管電泳分離效果的各項因素,如免疫反應孵育時間、電泳緩沖液的濃度與pH值、電泳分離電壓與進樣量等。 結(jié)果表明,在25kV電壓下,抗原抗體孵育5min后0.5psi壓力下進樣5s,電泳緩沖液組成為pH8.030mM Na2B4O7-10mM NaH2PO4,5min內(nèi)即可完成分離,各峰峰形好,分離度較高。新建立的分析方法在0.08～50ng/mL范圍內(nèi)線性良好,最低檢出限為0005ng/mL。將1ng/mL的諾氟沙星標準品進行毛細管電泳免疫分析,一天之內(nèi)重復進樣9次,連續(xù)5天,測得免疫復合物的遷移時間日內(nèi)精密度為0.17%,日間精密度為0.23%。將所建立的分析方法應用于雞肉、豬肉、魚肉和牛奶的檢測,經(jīng)提取分析后測得回收率在69.7%-92.4%之間,相對標準偏差小于6.5%,諾氟沙星在實際樣品中的最低檢出限為0.25μg/kg,表明新建立的方法能對食品中殘留的諾氟沙星準確定性定量。
【關(guān)鍵詞】：諾氟沙星 毛細管電泳 競爭性免疫 激光誘導熒光檢測器
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：S859.84;R155.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-23
• 1.1 食品安全檢測8-9
• 1.1.1 食品安全現(xiàn)狀8
• 1.1.2 食品安全檢測技術(shù)8-9
• 1.2 毛細管電泳技術(shù)9-14
• 1.2.1 毛細管電泳基本原理9-11
• 1.2.2 毛細管電泳儀基本結(jié)構(gòu)11-12
• 1.2.3 毛細管電泳技術(shù)在獸藥殘留中的應用12-14
• 1.3 毛細管電泳免疫分析檢測技術(shù)14-18
• 1.3.1 毛細管電泳免疫分析技術(shù)簡介14-17
• 1.3.2 毛細管電泳免疫分析技術(shù)應用17-18
• 1.4 諾氟沙星18-21
• 1.4.1 諾氟沙星理化性質(zhì)18
• 1.4.2 諾氟沙星作用機理18-19
• 1.4.3 諾氟沙星代謝動力學19
• 1.4.4 諾氟沙星殘留的危害19
• 1.4.5 諾氟沙星檢測研究進展19-21
• 1.5 本論文研究目的和意義21-22
• 1.6 本論文研究內(nèi)容22-23
• 2 材料與方法23-30
• 2.1 實驗材料23-26
• 2.1.1 主要材料與試劑23-24
• 2.1.2 主要儀器設備24-25
• 2.1.3 溶液配制25
• 2.1.4 三乙胺精制25
• 2.1.5 乙二胺精制25-26
• 2.2 實驗方法26-28
• 2.2.1 抗體純化與濃度測定26
• 2.2.2 熒光標記諾氟沙星合成與純化26-27
• 2.2.3 熒光標記諾氟沙星表征27
• 2.2.4 實驗條件27
• 2.2.5 標準曲線繪制27-28
• 2.2.6 樣品預處理28
• 2.3 方法性能評價指標28-30
• 2.3.1 毛細管電泳分離效率28
• 2.3.2 毛細管電泳免疫分析方法準確度28-29
• 2.3.3 毛細管電泳免疫分析方法精密度29-30
• 3 結(jié)果與討論30-57
• 3.1 熒光標記諾氟沙星合成30-34
• 3.1.1 制備EDF-NOR熒光標記物30-33
• 3.1.2 制備FITC-NOR熒光標記物33-34
• 3.2 熒光標記物的純化與篩選34-39
• 3.2.1 質(zhì)譜法檢測36-37
• 3.2.2 毛細管電泳免疫分析法檢測37-39
• 3.3 毛細管電泳分離條件優(yōu)化39-48
• 3.3.1 抗體蛋白吸附抑制39-41
• 3.3.2 毛細管柱尺寸選擇41
• 3.3.3 熒光標記物與抗體工作濃度41-42
• 3.3.4 免疫復合物形成時間42-43
• 3.3.5 免疫復合物形成溫度43-44
• 3.3.6 毛細管電泳緩沖液種類與pH44-46
• 3.3.7 毛細管電泳緩沖液濃度46
• 3.3.8 毛細管電泳分離電壓與分離柱溫46-48
• 3.3.9 毛細管電泳進樣稀釋液與進樣條件48
• 3.4 標準曲線建立48-49
• 3.5 毛細管電泳免疫分析交叉反應率49-50
• 3.6 樣品測定50-55
• 3.7 毛細管電泳免疫分析法與ELISA比較55-57
• 4 結(jié)論57-58
• 5 展望58-59
• 6 參考文獻59-68
• 7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況68-69
• 8 致謝69

【參考文獻】

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本文編號：712717