本文關鍵詞：維生素D對母鼠圍生期雙酚A暴露所致子代Treg細胞減少的影響

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【摘要】：研究背景環(huán)境內(nèi)分泌干擾化學物(environmental endocrine disrupting chemical,EDC)雙酚A(Bisphenol A,BPA)是工業(yè)上合成聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂的主要單體,廣泛應用于奶瓶、食品和飲料包裝材料等人類日常生活用品,醫(yī)療設備以及熱敏紙等的制造。隨著需求量的日益增加,BPA已經(jīng)成為世界上高產(chǎn)量化學物之一。在遇到酸、堿或加熱情況下,BPA會從這些物品中釋放出來,經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚等多種途徑進入人體,人群調(diào)查顯示人類已廣泛暴露于環(huán)境BPA。BPA具有弱雌激素活性,對機體內(nèi)分泌、神經(jīng)行為、生殖發(fā)育等可產(chǎn)生不良影響,嚴重威脅著人類的健康。近年來的研究發(fā)現(xiàn)圍生期母體BPA暴露對子代出生后免疫功能有明顯影響,如改變CD4+T細胞亞群輔助性T細胞(T helper cell,Th)1和Th2的平衡,減少調(diào)節(jié)性T細胞(T regulation cell,Treg)等。但是有關BPA發(fā)育免疫毒作用的干預研究的報道較少。維生素D(Vitamin D,Vit D)是機體生長發(fā)育所必需的一類維生素,研究顯示Vit D在免疫應答中也發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。到目前為止,Vit D對圍生期BPA暴露引起的子代Treg細胞減少有何影響尚不清楚。研究目的研究不同劑量Vit D補充對圍生期BPA暴露母鼠所生子代出生后脾臟Treg細胞數(shù)量減少、特異性轉(zhuǎn)錄因子FOXP3 mRNA表達水平下調(diào)及血清中Treg細胞分泌的白介素(interleukin,IL)-10和炎性因子IL-1以及腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量降低的改變,探討Vit D補充對母鼠圍生期BPA暴露所致子代Treg細胞減少的影響。研究方法8周齡icr雌鼠和9周齡icr雄鼠適應性飼養(yǎng)1周,交配并查到陰栓確認為受孕。將孕鼠隨機分為空白對照組、溶劑對照組、1000nmbpa暴露組、1000nmbpa+0.25μg/kgvitd組、1000nmbpa+1μg/kgvitd組、1000nmbpa+4μg/kgvitd組。母鼠自懷孕第1天(gestationday1,gd1)至子代出生后(postnatalday,pnd)21天,每天經(jīng)飲水攝入bpa,同期每天經(jīng)腹腔注射給予不同劑量vitd。子代在pnd21和pnd42時,分別采集外周血用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)檢測血清il-10、il-1和tnf-α含量;處死仔鼠,無菌取脾臟,部分制成細胞懸液用流式細胞儀(flowcytometry,fcm)測定treg細胞數(shù)量,部分用于提取mrna用實時熒光定量聚合酶鏈反應(realtime-quantitativepolymerasechainreaction,rt-qpcr)分析treg細胞特異轉(zhuǎn)錄因子foxp3mrna表達水平,實驗結(jié)果用spss13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。結(jié)果1.一般情況整個試驗期間,各組孕鼠一般情況良好,孕期未觀察到流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)和母鼠死亡現(xiàn)象,母鼠體重增長各組間差異無統(tǒng)計學意義;子代出生至斷乳期間(pnd21)子鼠的平均窩仔數(shù)、平均體重各組間差異均無統(tǒng)計學意義;pnd42時除1000nmbpa暴露組子鼠體重高于空白對照組且差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)外,其余各組間體重差異均無統(tǒng)計學意義。2.vitd補充對母鼠圍生期bpa暴露所致子代脾臟treg細胞數(shù)量減少的影響母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa引起子代出生后脾臟treg細胞數(shù)量明顯減少,1000nmbpa暴露組母鼠所生子代脾臟treg細胞數(shù)量,pnd21時與空白對照組比較明顯減少(p0.01),pnd42時差異無統(tǒng)計學意義。同期補充vitd對母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa引起的子代脾臟treg細胞數(shù)減少具有一定的改善作用,且具有劑量效應關系。pnd21時,中劑量vitd補充組母鼠所生子代脾臟treg細胞數(shù)較1000nmbpa暴露組有所上升(p0.05),高劑量vitd補充組母鼠所生子代脾臟treg細胞數(shù)與1000nmbpa暴露組比較明顯上升(p0.01),且與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。pnd42時,各組母鼠所生子代脾臟treg細胞數(shù)組間差異均無統(tǒng)計學意義。3.vitd補充對母鼠圍生期bpa暴露所致子代脾臟foxp3mrna表達下調(diào)的影響母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa可引起子代出生后脾臟foxp3mrna表達下調(diào),1000nmbpa暴露組母鼠所生子代脾臟foxp3mrna表達水平,在pnd21時較空白對照組明顯減少(p0.01),pnd42時與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義。同期補充vitd對母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa所引起的子代脾臟foxp3mrna表達下調(diào)具有一定的抑制作用,且呈劑量效應關系。pnd21時,高劑量vitd補充組母鼠所生子代脾臟foxp3mrna表達水平,與1000nmbpa暴露組比較明顯上升(p0.05),且與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。pnd42時,各組母鼠所生子代脾臟foxp3mrna表達水平組間差異均無統(tǒng)計學意義。4.vitd補充對母鼠圍生期bpa暴露所致子代血清treg細胞分泌的細胞因子il-10含量降低的影響母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa可引起子代出生后血清中il-10含量降低,1000nmbpa暴露組母鼠所生子代血清il-10含量,在pnd21時與空白對照組比較明顯降低(p0.01),pnd42時與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義。同期補充vitd對母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa所引起的子代血清il-10含量降低具有一定的抑制作用,且呈劑量效應關系。pnd21時,高劑量vitd補充組母鼠所生子代血清il-10含量,與1000nmbpa暴露組比較明顯上升(p0.05),且與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義。pnd42時,各組母鼠所生子代血清il-10含量組間差異均無統(tǒng)計學意義。5.vitd補充對母鼠圍生期bpa暴露所致子代血清炎性因子il-1和tnf-α含量升高的影響母鼠圍生期飲水攝入1000nmbpa可引起子代出生后血清中炎性因子il-1和tnf-α含量升高,1000nmbpa暴露組母鼠所生子代血清il-1和tnf-α含量,在pnd21時與空白對照組比較明顯升高(p0.01),pnd42時與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義。同期補充Vit D對母鼠圍生期飲水攝入1000 nM BPA所引起的子代出生后血清IL-1和TNF-α含量升高具有一定的抑制作用,且呈劑量效應關系。在PND21時,中劑量Vit D補充組母鼠所生子代血清IL-1含量,與1000 nM BPA暴露組比較有所下降(P0.05),高劑量Vit D補充組母鼠所生子代血清IL-1含量與1000 nM BPA暴露組比較明顯下降(P0.01),且與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義;高劑量Vit D補充組母鼠所生子代血清TNF-α含量與1000 nM BPA暴露組比較明顯下降(P0.01),且與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義;在PND42時,各組母鼠所生子代血清IL-1和TNF-α含量組間差異均無統(tǒng)計學意義。結(jié)論1.母鼠圍生期經(jīng)水攝入BPA可導致子代出生后不同時期Treg細胞數(shù)量減少、特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA表達下調(diào)、血清中Treg細胞分泌的細胞因子IL-10含量降低以及炎性因子IL-1和TNF-α含量升高。2.Vit D補充對母鼠圍生期BPA暴露引起的子代出生后Treg細胞改變具有一定的抑制作用,可抑制母鼠BPA暴露所致子代Treg細胞數(shù)量的減少、Foxp3 mRNA表達的下調(diào)、血清中Treg細胞分泌的細胞因子IL-10含量的降低,以及炎性因子IL-1和TNF-α含量的升高,而且呈劑量效應關系。3.圍生期補充適當劑量的Vit D可能增加Treg細胞的數(shù)量或(和)提高其功能,從而對環(huán)境BPA暴露引起的發(fā)育免疫毒性產(chǎn)生一定的抑制作用。
【關鍵詞】：雙酚A 維生素D Treg細胞 發(fā)育免疫毒性
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 1 引言16-18
• 2 材料與方法18-22
• 3 結(jié)果22-36
• 4 討論36-41
• 5 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 個人簡歷48-49
• 致謝49-50
• 綜述50-63
• 參考文獻58-63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 焦鳳茹;孫秀娟;龐振濤;;雙酚A市場分析[J];化學工業(yè);2008年09期

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本文編號：670811