發(fā)布時間：2017-08-13 02:08

  本文關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸丁基芐酯小鼠神經(jīng)毒性的體內(nèi)和體外研究

  更多相關(guān)文章： 鄰苯二甲酸丁基芐酯 Morris水迷宮 5-HT pCREB 顯微熒光觀察 cAMP 氧化損傷

【摘要】：目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了有關(guān)于鄰苯二甲酸丁基芐酯(Butyl benzyl phthalate, BBP)的生殖、發(fā)育、氧化損傷及內(nèi)分泌具有一定的毒性干擾作用,然而BBP對動物和人類的神經(jīng)毒性以及BBP在體內(nèi)具體的作用機(jī)制究竟是怎么樣的呢?目前還尚待進(jìn)一步深入的進(jìn)行研究與探索。 本研究采用體外細(xì)胞活力測定、神經(jīng)細(xì)胞毒性實驗、凋亡作用和體內(nèi)整體動物小鼠行為學(xué)實驗、酶活測定、顯微熒光技術(shù)相結(jié)合的實驗方法,來進(jìn)行BBP神經(jīng)毒性的綜合評價。本研究還平行比較了BBP、DBP以及它們共同的代謝產(chǎn)物MBP對細(xì)胞的毒性效應(yīng)；通過對腦組織切片進(jìn)行分析、神經(jīng)遞質(zhì)的變化情況來初步探討B(tài)BP對小鼠學(xué)習(xí)與記憶能力的影響情況以及可能存在的分子機(jī)制。 本研究在體外研究中主要是通過MTT法和Hoechst33258染色來進(jìn)行鄰苯二甲酸丁基芐酯的細(xì)胞毒性評價；通過對染毒細(xì)胞ROS、MDA、GSH含量的檢測來探究BBP對小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞的氧化損傷效應(yīng)。分別采用濃度為的BBP、DBP、MBP來染毒細(xì)胞,通過對染毒細(xì)胞ROS、MDA、GSH含量的檢測來比較這三種物質(zhì)對小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞的毒性強(qiáng)弱。 在進(jìn)行體內(nèi)試驗時,利用一系列的濃度梯度分別為0(對照組),50,250及1,250mg/kg的BBP連續(xù)兩個周對實驗小鼠進(jìn)行灌胃染毒,同時通過一系列的行為學(xué)經(jīng)典實驗：Morris水迷宮,懸尾試驗以及強(qiáng)迫游泳試驗,反映BBP對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。分別測定了腦、肝、腎組織的氧化損傷水平。為了進(jìn)一步探究BBP毒性的可能存在的分子機(jī)制,測得了左腦組織中5-HT ((5-hydroxytryptamine)和p-CREB含量的變化情況。 根據(jù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)BBP對細(xì)胞和組織均有損傷作用。大腦海馬切片圖顯示,隨著BBP的暴露,小鼠海馬區(qū)細(xì)胞不完整性逐漸在增加,當(dāng)BBP的暴露濃度達(dá)到了最高濃度組即1,250mg/kg時,海馬區(qū)細(xì)胞開始凋亡,而且約有1/3的背側(cè)海馬細(xì)胞(控制小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力)受到損傷,BBP高濃度的暴露造成了海馬CA1區(qū)與DG區(qū)的神經(jīng)元表現(xiàn)出遲發(fā)性的空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙。在BBP暴露之后,降低了神經(jīng)遞質(zhì)5-HT的水平,從而通過cAMP/PKA所介導(dǎo)的信號通路下調(diào)了CREB磷酸化水平,進(jìn)一步減弱了CREB的下游分子事件,從而影響了行為學(xué)的表現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：鄰苯二甲酸丁基芐酯 Morris水迷宮 5-HT pCREB 顯微熒光觀察 cAMP 氧化損傷
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 1. 文獻(xiàn)綜述11-17
• 1.1 BBP簡介11-12
• 1.2 BBP的理化性質(zhì)12-13
• 1.3 BBP的來源與用途13-14
• 1.3.1 BBP的來源13
• 1.3.2 BBP的用途13-14
• 1.4 BBP的毒性作用研究進(jìn)展14-15
• 1.4.1 生殖毒性14
• 1.4.2 發(fā)育毒性14-15
• 1.4.3 氧化損傷和內(nèi)分泌干擾作用15
• 1.5 研究背景、內(nèi)容以及意義15-17
• 2. 材料與方法17-29
• 2.1 實驗材料17-18
• 2.1.1 受試細(xì)胞及受試動物17
• 2.1.2 實驗儀器17-18
• 2.1.3 實驗所需主要試劑及試劑盒18
• 2.2 BBP對N_2a細(xì)胞毒性作用實驗方法18-22
• 2.2.1 培養(yǎng)N_2a細(xì)胞18-19
• 2.2.2 染毒液的配制19
• 2.2.3 細(xì)胞鋪板和細(xì)胞染毒19-20
• 2.2.4 測定N_2a細(xì)胞MTT20
• 2.2.5 測定ROS(氧自由基)水平及顯微熒光照相20-21
• 2.2.6 BBP對細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量的影響21
• 2.2.7 BBP對細(xì)胞中谷胱甘肽(GSH)含量的影響21
• 2.2.8 觀察N_2a細(xì)胞凋亡21-22
• 2.2.9 BBP、DBP、MBP的毒性比較22
• 2.3 BBP對昆明小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力影響的實驗方法22-29
• 2.3.1 染毒方法22-24
• 2.3.2 Morris水迷宮實驗24-25
• 2.3.3 懸尾實驗25
• 2.3.4 強(qiáng)迫游泳實驗25-26
• 2.3.5 組織勻漿的制備26
• 2.3.6 氧自由基水平的測定26-27
• 2.3.7 丙二醛(MDA)含量的測定27
• 2.3.8 谷胱甘肽(GSH)含量的測定27
• 2.3.9 小鼠大腦海馬組織切片分析27-28
• 2.3.10 小鼠腦組織的5-HT和p-CREB的測定28
• 2.3.11 統(tǒng)計學(xué)分析28-29
• 3. 實驗結(jié)果29-45
• 3.1 BBP體外毒性研究結(jié)實驗結(jié)果29-35
• 3.1.1 N_2a細(xì)胞形態(tài)29
• 3.1.2 MTT實驗結(jié)果29-30
• 3.1.3 細(xì)胞凋亡的染色檢驗30-31
• 3.1.4 細(xì)胞中ROS水平及細(xì)胞顯微熒光圖31-32
• 3.1.5 MDA實驗結(jié)果32-33
• 3.1.6 GSH實驗結(jié)果33
• 3.1.7 BBP、DBP、MBP的毒性比較33-35
• 3.2 BBP對小鼠學(xué)習(xí)與記憶能力影響的實驗結(jié)果35-45
• 3.2.1 昆明小鼠體重的變化35-36
• 3.2.2 Morris水迷宮的實驗結(jié)果36-38
• 3.2.3 懸尾實驗結(jié)果38
• 3.2.4 強(qiáng)迫游泳實驗結(jié)果38-39
• 3.2.5 BBP對昆明小鼠大腦海馬區(qū)的影響39-40
• 3.2.6 BBP對小鼠腦部、肝臟、腎臟中ROS水平的影響40-41
• 3.2.7 BBP對腦、肝、腎組織中MDA和GSH水平影響41-43
• 3.2.8 5-HT的改變43
• 3.2.9 腦組織中CREB磷酸化分析43-45
• 4. 討論45-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 附錄56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉霞;曹佳;;環(huán)境污染物鄰苯二甲酸酯致男性生殖損害的研究進(jìn)展[J];癌變.畸變.突變;2009年04期

2 石維佳;保庭毅;;鄰苯二甲酸酯類對雄性生殖系統(tǒng)的毒性作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年22期

3 李文蘭;季宇彬;姜安璽;楊波;張大雷;;環(huán)境激素鄰苯二甲酸丁基芐酯在動物臟器中的代謝[J];哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)報;2005年12期

4 李文蘭,季宇彬,楊玉楠,楊波;鄰苯二甲酸丁基芐酯的生殖毒性及其作用機(jī)制[J];環(huán)境科學(xué);2004年01期

5 吳平谷,韓關(guān)根,王惠華,趙瑩;飲用水中鄰苯二甲酸酯類的調(diào)查[J];環(huán)境與健康雜志;1999年06期

6 楊波,李文蘭,季宇彬;鄰苯二甲酸丁基芐酯與鄰苯二甲酸二丁酯的雌激素生物活性比較[J];哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2002年06期

7 呂東陽,李文蘭;環(huán)境激素作用機(jī)制的研究[J];哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2003年01期

8 李文英;余鴻;;大鼠海馬神經(jīng)元參與學(xué)習(xí)記憶能力的機(jī)制及影響因素的研究進(jìn)展[J];四川解剖學(xué)雜志;2012年01期

9 鐘儒杰;魯興萌;屠振力;;環(huán)境激素鄰苯二甲酸丁基芐酯對家蠶生長發(fā)育的影響[J];生態(tài)毒理學(xué)報;2010年05期

10 馬萍;杜娟;羅清;趙靜云;尤會會;楊旭;;納米Fe_3O_4對小鼠肺細(xì)胞的氧化損傷[J];生態(tài)毒理學(xué)報;2012年01期

，

本文編號：664816