本文關鍵詞：發(fā)育早期鉛暴露對小鼠空間學習記憶能力和β-淀粉樣前體蛋白表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鉛具有神經(jīng)毒性，長期低劑量暴露于鉛污染環(huán)境，可對人體各器官，，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)造成慢性不可逆損傷。生長發(fā)育期兒童對鉛尤為敏感，鉛在大腦中的蓄積可導致兒童學習記憶能力下降、認知障礙、發(fā)育遲緩等一系列損傷。β-淀粉樣前體蛋白（beta-amyloid precursor protein，APP）是與學習記憶相關的蛋白片段，它的代謝異常可直接影響神經(jīng)系統(tǒng)功能，研究表明鉛可致APP水解途徑的改變，產(chǎn)生大量具有神經(jīng)毒性β-淀粉樣蛋白（beta-Amyloid Protein，Aβ），誘發(fā)細胞凋亡，造成學習記憶能力受損，并與遲發(fā)型阿爾茨海默病發(fā)生發(fā)展有一定關系。 目的 通過觀察不同劑量水平鉛暴露對生長發(fā)育期小鼠空間學習記憶能力、血鉛和海馬組織鉛含量及海馬中APP蛋白表達的影響，以及通過分析它們之間的相關性，探討APP蛋白在鉛毒性作用中的可能機制，從而為判定鉛暴露的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性損傷及其防治提供理論依據(jù)。 方法 健康清潔級斷乳（21天）C57BL/6雄性小鼠48只，按體重隨機分為四個組，分別是對照組、低劑量鉛暴露組、中劑量鉛暴露組和高劑量鉛暴露組。嚴格控制飼養(yǎng)環(huán)境條件，以自由飲水的模式給予四組小鼠去離子水、0.2%、0.4%、0.6%醋酸鉛水溶液，持續(xù)三個月。從染毒開始每月稱量一次小鼠體重并記錄。染毒結(jié)束后，每組小鼠進行Morris水迷宮實驗，測定小鼠空間學習記憶能力，記錄其前四天的逃避潛伏期，分析學習能力，記錄最后一天的穿越平臺次數(shù)，考察其記憶能力。水迷宮實驗結(jié)束后兩天，對小鼠進行麻醉后眼球采血，收集全血，每組隨機抽取三只小鼠取全腦，進行常規(guī)固定、脫水、包埋和切片，用免疫組織化學法觀察其APP蛋白表達量和分布情況。其余小鼠取腦并分離海馬組織，用Z-5000偏振塞曼原子吸收光譜儀測定小鼠血鉛、海馬鉛含量及勻漿提取總蛋白，Western Blot技術測定APP蛋白含量。 結(jié)果 體重測量結(jié)果顯示：低劑量組體重略低于對照組，但中、高劑量暴露組與對照組相比，差異均具有統(tǒng)計學意義（P0.01）；且中、高劑量組體重均低于低劑量暴露組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 水迷宮實驗結(jié)果顯示：前4天，與對照組相比，各劑量暴露組逃避潛伏期明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；各劑量暴露組之間比較，高劑量組潛伏期明顯延長，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。第6天，各劑量暴露組逃避潛伏期均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）；穿越平臺次數(shù)與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 鉛含量測定結(jié)果顯示：各劑量鉛暴露組小鼠血鉛和海馬鉛含量均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。暴露組之間比較，中、高劑量暴露組血鉛含量和海馬組織鉛含量均高于低劑量鉛暴露組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 免疫組化實驗結(jié)果顯示：各鉛暴露組小鼠海馬的CA1區(qū)APP陽性反應物的平均積分光密度高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)；各劑量組之間比較，差異也均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 Western Blot實驗結(jié)果顯示：各劑量鉛暴露組小鼠APP蛋白表達量均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05），且中、高劑量暴露組高于低劑量暴露組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 相關性分析結(jié)果：血鉛和海馬鉛含量與學習記憶能力呈顯著負相關（P0.01）；APP蛋白表達量與血鉛、海馬鉛含量呈顯著正相關（P0.01），與學習記憶能力呈顯著負相關（P0.01）。結(jié)論 （1）發(fā)育早期鉛暴露可使小鼠體重增長遲緩，使血液鉛和海馬組織鉛含量明顯升高； （2）發(fā)育早期鉛暴露，可影響小鼠水迷宮測試成績，損傷小鼠空間學習和記憶能力； （3）發(fā)育早期鉛暴露致小鼠海馬APP蛋白表達量增高，并與血鉛、海馬鉛含量正相關，與空間學習記憶能力行為學實驗結(jié)果顯著負相關，表明APP可能在發(fā)育早期鉛暴露致小鼠空間學習記憶能力及神經(jīng)系統(tǒng)損傷機制中起重要作用。
【關鍵詞】：鉛 空間學習記憶能力 APP蛋白 小鼠
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 縮略詞索引表11-12
• 1 引言12-15
• 2 材料和方法15-29
• 2.1 材料15-20
• 2.1.1 實驗動物及飼養(yǎng)條件15
• 2.1.2 主要實驗試劑15-16
• 2.1.3 主要實驗儀器16-17
• 2.1.4 主要試劑配制17-20
• 2.2 實驗方法20-29
• 2.2.1 動物模型制備和分組20
• 2.2.2 小鼠體重的測定20
• 2.2.3 小鼠空間學習記憶能力的測定20-21
• 2.2.4 動物標本采集21
• 2.2.5 小鼠血鉛及海馬鉛含量的測定21-23
• 2.2.6 免疫組織化學法檢測 APP 蛋白的表達23-25
• 2.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測小鼠 APP 蛋白表達25-28
• 2.2.8 統(tǒng)計學分析28-29
• 3 結(jié)果29-37
• 3.1 不同劑量鉛暴露小鼠體重測定結(jié)果29-30
• 3.2 不同劑量鉛暴露小鼠水迷宮實驗結(jié)果30-32
• 3.3 不同劑量鉛暴露小鼠血鉛及海馬組織鉛含量結(jié)果32-33
• 3.4 不同劑量鉛暴露對小鼠 APP 蛋白表達免疫組化分析33-34
• 3.5 不同劑量鉛暴露對小鼠 APP 蛋白 Western Blot 分析34-35
• 3.6 相關性分析35-37
• 4 討論37-42
• 4.1 動物模型的構(gòu)建及動物基本情況監(jiān)測37-38
• 4.2 鉛暴露對小鼠血液和海馬組織中鉛含量的影響38-39
• 4.3 鉛對小鼠空間學習記憶能力的影響39-40
• 4.4 鉛對小鼠海馬組織 APP 蛋白表達和分布的影響40-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述47-62
• 參考文獻57-62
• 個人簡歷在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果62-63
• 致謝63

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：發(fā)育早期鉛暴露對小鼠空間學習記憶能力和β-淀粉樣前體蛋白表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：463383