本文關(guān)鍵詞：黑莓體外模擬消化產(chǎn)物對肝細胞損傷防護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水果中的活性物質(zhì)在人體胃腸消化過程中會發(fā)生轉(zhuǎn)化和降解,為科學評價水果的營養(yǎng)價值、抗氧化活性和對人體的功能性,本文結(jié)合體外模擬胃腸道消化模型和細胞模型,研究了黑莓在模擬胃腸道消化不同階段的抗氧化成分(多酚、黃酮、花色苷、原花青素)的含量、抗氧化還原活性及對肝細胞氧化損傷的防護作用,并深入探究其防護作用機理。 從天然植物中挖掘安全有效的功能因子,探索其防護細胞氧化損傷的作用,已成為近年來功能性食品和天然藥物研究領(lǐng)域的一個熱點。黑莓具有降壓、降血脂和抗心律失常等功能功效,但是有關(guān)其消化產(chǎn)物對丙烯酰胺(AA)所致肝細胞損傷防護作用至今未見報道。本論文以丙烯酰胺為肝細胞損傷的誘導劑,結(jié)合模擬消化模型和HepG2細胞模型,從抗氧化性、細胞活力、酶活性及基因表達等幾方面探究黑莓體外消化產(chǎn)物對肝細胞的損傷防護作用及其相關(guān)機理。主要結(jié)果如下： (1)黑莓體外消化產(chǎn)物的活性成分含量及抗氧化還原活性 采用模擬胃消化和模擬腸消化兩個階段的體外消化模型,發(fā)現(xiàn)體外胃腸消化會對黑莓多酚、黃酮、花色苷及原花青素的含量產(chǎn)生不同程度的影響。ABTS抗氧化實驗結(jié)果表明,經(jīng)模擬腸消化后,黑莓抗氧化活性與未消化組相比提高了47.06%,其中未消化、胃消化和腸消化的IC50分別為6.12mg/mL、4.5mg/mL、3.24mg/mL; FRAP測定黑莓體外消化前后氧化還原活性結(jié)果顯示,胃消化后還原能力提高,其中未消化、胃消化及腸消化組分的Trolox等價抗氧化能力分別為2.46、4.32、2.45μg/mg黑莓(鮮重)。 (2)黑莓體外消化產(chǎn)物對HepG2細胞的損傷防護作用 使用HepG2細胞模型檢測細胞活力,結(jié)果表明0.25-2mg/mL的黑莓體外消化組分對細胞不會產(chǎn)生毒性,而丙烯酰胺會導致肝細胞HepG2損傷(細胞存活率63.37%),而黑莓腸消化組分(0.5mg/mL)能顯著抑制丙烯酰胺引發(fā)的細胞毒性(細胞存活率85.19%)。進一步運用動態(tài)熒光可視技術(shù)、分子探針等現(xiàn)代分子生物學技術(shù),研究細胞防護作用機理,發(fā)現(xiàn)黑莓體外消化產(chǎn)物能夠有效降低細胞內(nèi)活性氧自由基的含量,防護細胞線粒體氧化損傷和細胞核損傷,恢復(fù)線粒體膜電位及細胞谷胱甘肽的含量,從而防護了細胞的氧化損傷。 (3)黑莓體外消化產(chǎn)物防護細胞氧化損傷作用機理的探究 通過檢測細胞抗氧化酶類SOD和CAT的活性,發(fā)現(xiàn)黑莓腸消化樣品(0.5mg/mL)能有效恢復(fù)氧化損傷導致的SOD、CAT酶活性降低,可見黑莓體外消化產(chǎn)物可提高細胞內(nèi)SOD和CAT等抗氧化酶類的活性,使機體抗氧化能力增強從而防護細胞氧化損傷。通過檢測抗氧化及二相解毒酶類基因Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS、GSTP1、SOD1和CAT在轉(zhuǎn)錄水平上的表達變化,發(fā)現(xiàn)在丙烯酰胺的氧化損傷下,細胞由于自身的防御機制,使抗氧化基因的表達量有所提高,其中CAT的表達量受到抑制,Nrf2和GSTP1基因無顯著變化；而在黑莓腸消化產(chǎn)物的作用下,會使抗氧化基因的表達量進一步升高,增加細胞的抗氧化能力。本研究證明黑莓體外消化產(chǎn)物對HepG2細胞二相解毒酶HO-1、NQO1及Y-GCS基因有一定的誘導作用,并通過恢復(fù)抗氧化酶SOD和CAT的酶活實現(xiàn)對細胞氧化損傷的防護作用。 綜上所述,本文的研究結(jié)果為科學評價水果功能性因子及其防護細胞損傷作用機理的研究提供了一種思路和方法,為開發(fā)天然、安全、有效的黑莓功能性產(chǎn)品提供一定的科學依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：黑莓 體外消化 HepG2細胞 丙烯酰胺 二相酶
【學位授予單位】：浙江工商大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TS255.1;R151
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-12
• 目錄12-15
• 第1章 緒論15-27
• 1.1 黑莓概況15-16
• 1.2 黑莓的活性成分16-19
• 1.2.1 多酚16-17
• 1.2.2 黃酮17
• 1.2.3 花色苷17-18
• 1.2.4 原花青素18-19
• 1.3 體外模擬胃腸道消化19-20
• 1.4 丙烯酰胺20-21
• 1.5 抗氧化防御體系21-26
• 1.5.1 氧化應(yīng)激21-22
• 1.5.2 抗氧化酶類22-24
• 1.5.3 抗氧化評價方法24-26
• 1.6 本文的立題依據(jù)、研究內(nèi)容及意義26-27
• 第2章 黑莓體外模擬消化產(chǎn)物活性成分及抗氧化活性的研究27-41
• 2.1 前言27
• 2.2 材料與試劑27-28
• 2.2.1 材料27
• 2.2.2 試劑27
• 2.2.3 主要設(shè)備27-28
• 2.3 方法28-31
• 2.3.1 體外模擬胃腸道消化28
• 2.3.2 總酚含量的測定28-29
• 2.3.3 黃酮含量的測定29
• 2.3.4 花色苷含量的測定29-30
• 2.3.5 原花青素含量的測定30
• 2.3.6 總抗氧化活性(ABTS)30-31
• 2.3.7 氧化還原能力(FRAP)31
• 2.3.8 統(tǒng)計分析31
• 2.4 實驗結(jié)果31-39
• 2.4.1 黑莓體外消化前后活性成分含量的變化31-36
• 2.4.2 黑莓體外消化前后的抗氧化活性36-39
• 2.5 討論與小結(jié)39-41
• 第3章 黑莓體外模擬消化產(chǎn)物對HEPG2細胞損傷保護作用的研究41-59
• 3.1 前言41
• 3.2 材料與試劑41-42
• 3.2.1 細胞系41
• 3.2.2 試劑41-42
• 3.2.3 主要設(shè)備42
• 3.3 方法42-45
• 3.3.1 MTT法檢測細胞活力42-43
• 3.3.2 活性氧自由基(ROS)的檢測43
• 3.3.3 線粒體膜電位的檢測43
• 3.3.4 谷胱甘肽(GSH)的檢測43-44
• 3.3.5 超氧陰離子的檢測44
• 3.3.6 線粒體氧化損傷的檢測44
• 3.3.7 Hoechst檢測細胞核的變化44
• 3.3.8 統(tǒng)計分析44-45
• 3.4 實驗結(jié)果45-56
• 3.4.1 HepG2細胞活力的影響45-48
• 3.4.2 HepG2細胞內(nèi)活性氧自由基的影響48-49
• 3.4.3 HepG2細胞線粒體膜電位的影響49-51
• 3.4.4 HepG2細胞谷胱甘肽水平的影響51-52
• 3.4.5 HepG2細胞超氧化物陰離子水平的影響52-54
• 3.4.6 HepG2細胞線粒體氧化損傷的影響54-55
• 3.4.7 HepG2細胞核損傷的影響55-56
• 3.5 討論與小結(jié)56-59
• 第4章 黑莓體外模擬消化產(chǎn)物對HEPG2細胞損傷防護機理的探究59-77
• 4.1 前言59
• 4.2 材料與試劑59-60
• 4.2.1 材料59
• 4.2.2 試劑59-60
• 4.2.3 主要設(shè)備60
• 4.3 方法60-65
• 4.3.1 細胞總蛋白的提取及測定60-61
• 4.3.2 細胞抗氧化酶活性的測定61-62
• 4.3.3 細胞總RNA的提取62-63
• 4.3.4 qPCR法檢測細胞基因的表達63-65
• 4.3.5 統(tǒng)計分析65
• 4.4 實驗結(jié)果65-74
• 4.4.1 HepG2細胞抗氧化酶類活性的影響65-69
• 4.4.2 HepG2細胞抗氧化相關(guān)基因表達的影響69-74
• 4.5 討論與小結(jié)74-77
• 第5章 總結(jié)與展望77-81
• 5.1 總結(jié)77-79
• 5.2 展望79-81
• 參考文獻81-89
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章89-91
• 致謝91-93

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本文編號：430779