目的:明確DEHP體內(nèi)代謝產(chǎn)物MEHP暴露對大鼠卵巢顆粒細胞凋亡的影響;探討PGE2在MEHP所致大鼠卵巢顆粒細胞凋亡中的作用及其機制,為預(yù)防DEHP引起的雌性生殖毒性,保護女性生殖健康提供科學(xué)依據(jù)。方法:使用DMEM-F12培養(yǎng)基+10%胎牛血清原代培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細胞,采用免疫熒光法對大鼠卵巢顆粒細胞進行純度檢測,CCK-8法檢測細胞存活率,根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果設(shè)置實驗分組與MEHP染毒劑量為:空白對照組、溶劑對照組（0.25‰DMSO）、200μM MEHP染毒組、250μM MEHP染毒組、300μM MEHP染毒組和350μM MEHP染毒組。流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率;Western Blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白（BAX、BCL-2、Caspase 3、Caspase 7）、PGE2受體（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的蛋白表達水平;Real-time PCR法檢測凋亡相關(guān)基因（BAX、BCL-2）、PGE2受體基因（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的mR... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 DEHP與MEHP概述
    1.2 DEHP及MEHP對卵泡發(fā)育的影響
    1.3 DEHP及MEHP對排卵的影響
    1.4 DEHP及MEHP對類固醇激素分泌的影響
    1.5 DEHP及MEHP對卵巢顆粒細胞的影響
    1.6 PGE2在卵巢顆粒細胞凋亡中的作用及機制
第2章 材料和方法
    2.1 主要儀器及試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要儀器
    2.2 大鼠卵巢顆粒細胞原代培養(yǎng)
        2.2.1 大鼠卵巢顆粒細胞提取
        2.2.2 大鼠卵巢顆粒細胞傳代培養(yǎng)及種板
        2.2.3 大鼠卵巢顆粒細胞鑒定
    2.3 MEHP染毒劑量的確定與分組
    2.4 PGE2劑量的確定與分組
    2.5 大鼠卵巢顆粒細胞凋亡檢測
    2.6 Western Blot法檢測蛋白表達水平
        2.6.1 大鼠卵巢顆粒細胞中總蛋白的提取
        2.6.2 蛋白濃度的測定
        2.6.3 蛋白表達水平檢測
    2.7 實時熒光定量PCR法檢測mRNA表達
        2.7.1 大鼠卵巢顆粒細胞總mRNA提取
        2.7.2 逆轉(zhuǎn)錄
        2.7.3 實時熒光定量PCR
    2.8 ELISA法檢測PGE2激素水平
    2.9 數(shù)據(jù)處理與分析
第3章 結(jié)果
    3.1 大鼠卵巢顆粒細胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 原代培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細胞鑒定
    3.3 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞存活率的影響
    3.4 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞凋亡的影響
    3.5 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞中PGE2激素水平的影響
    3.6 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞凋亡相關(guān)基因BAX、BCL-2表達的影響
        3.6.1 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞BAX、BCL-2蛋白表達水平的影響
        3.6.2 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞BAX、BCL-2 mRNA表達水平的影響
    3.7 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞凋亡相關(guān)基因Cle-Caspase 3、Cle-Caspase 7蛋白表達的影響
    3.8 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2受體表達的影響
        3.8.1 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2受體蛋白表達水平的影響
        3.8.2 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PTGER 2和PTGER 4 mRNA表達水平的影響
    3.9 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞中PGE2下游基因表達的影響
        3.9.1 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2下游蛋白表達水平的影響
        3.9.2 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2下游基因mRNA表達水平的影響
    3.10 外源性PGE2對卵巢顆粒細胞存活率的影響
    3.11 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達中的作用
    3.12 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細胞PGE2受體基因mRNA表達中的作用
    3.13 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細胞PGE2下游基因mRNA表達中的作用
第4章 討論
    4.1 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞存活及凋亡的影響
    4.2 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞凋亡相關(guān)基因的影響
    4.3 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2及前列腺素受體表達的影響
    4.4 MEHP對大鼠卵巢顆粒細胞PGE2下游基因表達的影響
    4.5 PGE2在MEHP影響大鼠卵巢顆粒細胞凋亡基因表達中的作用
第5章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3630524