研究目的:以TCDD為代表的二噁英是典型的環(huán)境內分泌干擾物,二噁英可透過胎盤屏障,由胎盤及乳汁進入胚胎及嬰兒體內,引發(fā)宮內及哺乳期二噁英暴露。世界衛(wèi)生組織2012年的文章指出,環(huán)境內分泌干擾物可對兒童早期發(fā)育產生不良影響,不僅包括引起隱睪、尿道下裂、青春期提前,還可影響兒童神經系統(tǒng)發(fā)育,對智力、行為和情感造成不良影響。健康與疾病的發(fā)育起源理論（Developmental Origins of Health and Disease,DOHaD）指出,宮內敏感時期及出生早期暴露于干擾,會改變器官功能與結構編碼（重新編碼）,進而引發(fā)暴露個體以后生命過程中發(fā)生行為學習障礙。本實驗希望就宮內暴露于環(huán)境內分泌干擾物TCDD對子代神經系統(tǒng)發(fā)育及記憶學習能力的影響進行探究,同時對造成這些影響的機制進行一定的探索。研究內容和方法:本研究主要探討TCDD宮內暴露對F1代雄鼠神經系統(tǒng)發(fā)育、神經行為及空間記憶學習能力的影響,主要內容總結如下。1.TCDD宮內暴露實驗動物模型的建立:Sprague-Dawley大鼠（SD大鼠）適應性飼養(yǎng)一周后合籠交配,陰栓出現(xiàn)即認為交配成功,并記為孕期第0天（GD0）。將孕鼠隨... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Morris水迷宮實驗操作流程

16.蒸餾水沖洗海馬組織切片 3 次；17.蘇木精(Hematoxylin)復染海馬神經元細胞核，常溫條件下作用 5min；18.蒸餾水沖洗海馬組織切片 1 次，沖洗液(Bond Wash Solution)常溫沖洗海馬組織切片 1 次，再用蒸餾水沖洗 1 次，切片梯度脫水，使用二甲苯透明切片，中性樹脂封片。本實驗檢測使用的顯色系統(tǒng)為 BOND Polymer Refine Detection 免疫組化檢測系統(tǒng)(Leica, German)。使用 Olympus X81 顯微鏡(Olympus,Japan)于明場下對海馬組織 CA1 區(qū)域免疫組化切片進行觀察與拍照，以用于進一步量化分析。該顯微鏡配有計算機輔助高清攝像頭，方便觀察者使用。采用圖像處理軟件 Image-ProPlus (Media Cybernetics, USA)對所拍攝照片中的膠質纖維酸性蛋白陽性(GFAP-positive)細胞的累計光密度值(integral optical density, IOD)進行分析。在此將整體實驗流程總結為圖 4，本實驗對宮內暴露于 TCDD 的 F1 代雄鼠神經系統(tǒng)發(fā)育的監(jiān)控從出生早期一直持續(xù)到成年期。

對照組 3.24±0.53 24.7±6.2 0.33±0.30 29.8±16.0 —200 ng/kg bw 3.12±0.60 30.6±2.1 0.29±0.17 40.0±6.16 —800 ng/kg bw 3.60±0.19 29.5±3.9 0.31±0.37 37.2±11.1 —注：*與對照組相比，p<0.05，“—”表示未達到檢出限。2.4 F1 代雄鼠成年期神經系統(tǒng)免疫組化2.4.1 F1 代雄鼠成年期海馬組織 CA1 區(qū)神經元尼氏染色結果在 40 倍視野下，可見各組雄鼠海馬組織生理結構保持完好，大鼠海馬本部CA1 區(qū)、CA3 區(qū)及齒狀回(dentate gyrus, DG)結構均清晰可見。對照組雄鼠 200倍鏡可見，海馬 CA1 區(qū)的錐體細胞層，錐體細胞層的細胞排列整齊，形態(tài)完整，胞漿內尼氏小體豐富，染為深藍色，局部可見藍染的神經元軸突,胞核圓形，核染色質為淡藍色，細胞輪廓清楚。200ng/kg bw 劑量組及 800ng/kg bw 劑量組雄鼠于對照組相比并無明顯可見差異，神經元結構較為清晰完整(見圖 6)。對海馬組織 CA1 區(qū)神經元進行細胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)，雖然與兩個劑量組相比，對照組單位面積上神經元數(shù)量稍有上升，但各組間的差異并沒有統(tǒng)計學意義(見圖 7)。


本文編號：3608312