本文關鍵詞：甲基硝基亞硝基胍致哈薩克族正常食管上皮細胞表觀遺傳改變的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討甲基硝基亞硝基胍(MNNG)對哈薩克族正常食管上皮細胞一般生物學及表觀遺傳學指標的改變,為哈薩克族食管癌的防治提供理論依據。方法：1聯(lián)合消化法培養(yǎng)原代哈族食管上皮細胞,細胞形態(tài)學和角蛋白免疫組織化學法鑒定細胞。2SV40-T抗原基因轉染原代培養(yǎng)的哈族正常食管上皮細胞,獲得永生化細胞系,采用RT-PCR法檢測SV40-T抗原基因在永生化細胞中的表達。3MTT法檢測細胞增殖改變、流式細胞術檢測細胞周期改變、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡改變。4高效液相色譜法(HPLC)測定基因組DNA整體甲基化水平改變。5甲基化特異性聚合酶鏈(MSP)法檢測P16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1基因甲基化狀態(tài)。6RT-PCR和Wersten Blot法檢測p16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA和蛋白表達。結果：(1)原代細胞培養(yǎng)8～10d后匯合成片,呈鋪路石樣生長,免疫組織化學法檢測細胞角蛋白表達陽性；(2)通過轉染SV40-T獲得永生化哈族正常食管上皮細胞,細胞形態(tài)和結構保持完好；(3)染毒后各組細胞抑制率均高于對照組(0μg/ml)；各組細胞G0+G1期比例低于對照組,而S期和G2+M期均高于對照組；中、高濃度組細胞凋亡率與對照組相比升高,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；(4)中、高濃度組細胞基因組整體DNA甲基化水平低于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；(5)高濃度組細胞DNMT1含量高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),各濃度組細胞DNMT1活性均高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；各濃度組細胞DNMT3a含量及DNMT3a活性均高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(0.05)；各濃度組細胞DNMT3b含量高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),高濃度組細胞DNMT3b活性高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(0.05)；(6)與對照組比較各濃度組細胞p16、FHIT、LRRFIP1基因甲基化狀態(tài)沒有改變；高濃度組細胞ALDH1L1基因有從部分甲基化向完全甲基化轉變的趨勢；(7)與對照組比較各濃度組細胞p16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1、DNMT1、DNMT3α和DNMT3b mRNA及蛋白表達水平均升高,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：(1)成功培養(yǎng)出原代哈族正常食管上皮細胞并建立了永生化哈族正常食管上皮細胞系。(2)MNNG抑制哈族正常食管上皮細胞增殖,將細胞周期阻滯在S期和G2+M期,并促進細胞凋亡。(3)MNNG可降低哈族正常食管上皮細胞基因組DNA整體甲基化水平,使ALDH1L1基因從部分甲基化向完全甲基化轉變。(4)MNNG提高了DNMT1、DNMT3a和DNMT3b酶活性,為抑癌基因甲基化提供了基礎。MNNG對哈薩克族食管正常上皮細胞一般生物學及表觀遺傳學指標有一定影響。
【關鍵詞】：哈薩克族 食管上皮細胞 原代培養(yǎng) MNNG 表觀遺傳
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 研究內容與方法15-37
• 1 實驗材料及試劑15-16
• 1.1 實驗儀器及設備15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 溶液配制16
• 2 實驗方法16-35
• 2.1 哈族正常食管上皮細胞原代培17-18
• 2.2 細胞永生化處理及鑒定18-22
• 2.3 染毒劑量的確定22
• 2.4 MNNG對細胞形態(tài)影響22
• 2.5 MNNG對細胞增殖的影響22-23
• 2.6 MNNG對細胞周期的影響23
• 2.7 MNNG對細胞凋亡的影響23
• 2.8 基因組DNA整體甲基化水平檢測23-25
• 2.9 DNA甲基轉移酶活性檢測25-27
• 2.10 MSP法檢測p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1基因甲基化狀態(tài)27-30
• 2.11 p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表達水平30-33
• 2.12 Western blot法檢測p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的蛋白表達33-35
• 3 質量控制35
• 4 數據及統(tǒng)計學處理35-36
• 5 技術路線36-37
• 結果37-74
• 討論74-82
• 小結82-83
• 致謝83-84
• 參考文獻84-91
• 綜述91-104
• 參考文獻100-104
• 攻讀碩士學棚間發(fā)表的學術論文104-105
• 導師評閱表105

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 鄧大君;CpG甲基化與癌變原理研究[J];中國肺癌雜志;2005年03期

2 冶俊玲;藺小倩;郭新建;王豐梅;;西寧地區(qū)回族和漢族胃癌中HP感染率及HER2表達與臨床病理指標的關系[J];高原醫(yī)學雜志;2012年03期

3 唐石伏;王慶;龐雅琴;賴延東;肖勇梅;張波;李道傳;陳麗萍;楊萍;陳雯;;化學致癌物誘導人胚腎上皮細胞轉化模型的構建[J];環(huán)境與健康雜志;2010年05期

4 吳軍;師U，

本文編號：360549