本文關(guān)鍵詞：不同來(lái)源Lfcin的抗腫瘤、抗炎癥及免疫調(diào)節(jié)作用的對(duì)比研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牛乳鐵蛋白素(Bovine Lactoferricin,Lfcin B)是牛乳中乳鐵蛋白在胃蛋白酶酸性環(huán)境水解產(chǎn)生的一種活性多肽,人乳鐵蛋白素(Human Lactoferricin,Lfcin H)是人乳中乳鐵蛋白水解產(chǎn)生的一種活性多肽,國(guó)內(nèi)外主要研究Lfcin B的生物活性,對(duì)Lfcin H研究較少,本課題用不同質(zhì)量濃度的Lfcin B和Lfcin H分別對(duì)白血病細(xì)胞Jurkat、小鼠巨噬細(xì)胞、小鼠脾淋巴細(xì)胞作用,探討Lfcin B和LfcinH的抗腫瘤、抗炎癥及免疫調(diào)節(jié)作用并比較兩者的差異性和相關(guān)性,為將Lfcin開(kāi)發(fā)成生物型抗腫瘤藥物、嬰兒配方奶粉和乳產(chǎn)品提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究采用MTT法檢測(cè)Lfcin B和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖影響;Hoechst33258染色法熒光顯微鏡觀(guān)察Jurkat細(xì)胞核的變化;運(yùn)用Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)將Lfcin B和Lfcin H促進(jìn)Jurkat細(xì)胞凋亡的階段進(jìn)行區(qū)分;JC-1染色激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的改變;采用Griess法測(cè)定Lfcin B和Lfcin H對(duì)LPS刺激后的小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO的含量;CCK-8法檢測(cè)Lfcin B和Lfcin H單獨(dú)作用對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響及與絲裂原共同作用對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖作用的影響;ELISA法測(cè)定巨噬細(xì)胞釋放TNF-α的含量和淋巴細(xì)胞釋放IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的含量。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下:(1)MTT結(jié)果顯示Lfcin H和Lfcin B對(duì)Jurkat細(xì)胞有顯著的抑制作用(P0.05),呈劑量依賴(lài)性;經(jīng)Lfcin B和Lfcin H處理后的Jurkat細(xì)胞在熒光顯微鏡下均可見(jiàn)細(xì)胞核皺縮、碎裂呈凋亡特征;激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察到Jurkat細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位下降;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Jurkat細(xì)胞經(jīng)Lfcin B和Lfcin H處理48 h時(shí)主要發(fā)生早期凋亡。研究結(jié)果表明100~300μg/mL的Lfcin B和Lfcin H可顯著抑制Jurkat細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,150μg/m L的Lfcin H和250μg/m L的Lfcin B為抑制Jurkat細(xì)胞增殖的最佳作用濃度,推斷Jurkat細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能是通過(guò)影響線(xiàn)粒體膜電位導(dǎo)致Jurkat細(xì)胞凋亡并抑制細(xì)胞增殖。(2)Griess法和CCK-8結(jié)果顯示,Lfcin B和Lfcin H能顯著抑制LPS刺激后的Balb/c小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO和TNF-α,呈劑量依賴(lài)性,與空白組相比具有顯著差異(P0.05)但均低于LPS對(duì)照組(1μg/mL的LPS)。100μg/m L的Lfcin H和150μg/m L的LfcinB為抑制巨噬細(xì)胞釋放NO和TNF-α的最佳作用濃度,LPS活化后可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO和促炎癥細(xì)胞因子TNF-α,推測(cè)Lfcin B和Lfcin H可能是通過(guò)抑制NO的釋放和促炎癥細(xì)胞因子TNF-α的分泌,避免機(jī)體組織受到損傷,達(dá)到了抗炎的目的。(3)CCK-8結(jié)果顯示,Lfcin B和Lfcin H能有效的促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖,并與Con A、LPS對(duì)T、B淋巴細(xì)胞的增殖有協(xié)同刺激作用,并且能顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞體外分泌細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α,與對(duì)照組相比具有顯著差異(P0.05),研究結(jié)果表明Lfcin B和Lfcin H質(zhì)量濃度分別在為150μg/mL、100μg/m L與48 h時(shí)脾淋巴細(xì)胞的增殖效果最佳,四種細(xì)胞因子的分泌量均達(dá)到最大,推測(cè)Lfcin B和Lfcin H可能是通過(guò)促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)其分泌細(xì)胞因子,從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能。綜上所述,本研究可以得出以下結(jié)論:Lfcin B和Lfcin H能夠抑制Jurkat細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,抑制LPS刺激后的Balb/c小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO和分泌細(xì)胞因子TNF-α。及促進(jìn)Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的分泌水平,因此Lfcin B和Lfcin H起到了抗腫瘤、抗炎癥和免疫調(diào)節(jié)作用,Lfcin B與Lfcin H在這三個(gè)功能性質(zhì)上具有同等功效,只是在劑量上稍有差別,本研究為下一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)打下了良好的基礎(chǔ),也為來(lái)源廣泛的牛乳組分替代母乳提供了實(shí)驗(yàn)支撐,豐富了天然抗腫瘤藥物的研制工作,也為嬰兒配方奶粉及免疫調(diào)節(jié)食品的開(kāi)發(fā)開(kāi)辟了新道路。
【關(guān)鍵詞】：牛乳鐵蛋白素 人乳鐵蛋白素 Jurkat細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 脾淋巴細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R151
【目錄】：

• 摘要10-12
• 英文摘要12-15
• 1 引言15-23
• 1.1 立題背景15-17
• 1.1.1 乳鐵蛋白素的發(fā)現(xiàn)15-16
• 1.1.2 乳鐵蛋白素的結(jié)構(gòu)16-17
• 1.2 乳鐵蛋白素的生物學(xué)功能及其作用機(jī)制17-19
• 1.2.1 乳鐵蛋白素抗菌活性17-18
• 1.2.2 乳鐵蛋白素抗癌活性18
• 1.2.3 乳鐵蛋白素抗炎癥和免疫調(diào)節(jié)活性18-19
• 1.3 細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞因子的概括19-20
• 1.3.1 細(xì)胞增殖19
• 1.3.2 細(xì)胞凋亡19-20
• 1.3.3 細(xì)胞因子20
• 1.4 研究的目的和意義20-21
• 1.4.1 研究目的20-21
• 1.4.2 研究意義21
• 1.5 研究?jī)?nèi)容21-23
• 2 材料與方法23-34
• 2.1 材料23-25
• 2.1.1 細(xì)胞系23
• 2.1.2 乳鐵蛋白素23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材23-24
• 2.1.5 儀器設(shè)備24-25
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)所用試劑的配置25
• 2.2 方法25-34
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備25-26
• 2.2.2 Jurkat細(xì)胞的體外培養(yǎng)26-27
• 2.2.3 光學(xué)顯微鏡觀(guān)察Jurkat細(xì)胞形態(tài)27
• 2.2.4 MTT法檢測(cè)Jurkat細(xì)胞增殖能力27
• 2.2.5 熒光顯微鏡觀(guān)察Jurkat細(xì)胞凋亡形態(tài)27-28
• 2.2.6 Annexin-FITC/PI雙標(biāo)記法檢測(cè)Jurkat細(xì)胞凋亡率28-29
• 2.2.7 JC-1 標(biāo)記法檢測(cè)Jurkat細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位29
• 2.2.8 小鼠巨噬細(xì)胞的體外分離純化培養(yǎng)29
• 2.2.9 Griess法測(cè)定巨噬細(xì)胞NO分泌量29-30
• 2.2.10 ELISA法檢測(cè)巨噬細(xì)胞TNF-α 分泌量30
• 2.2.11小鼠脾淋巴細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)30-31
• 2.2.12光學(xué)顯微鏡觀(guān)察脾淋巴細(xì)胞形態(tài)31
• 2.2.13 CCK-8 法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞的增殖能力31-32
• 2.2.14 CCK-8 法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的增殖能力32
• 2.2.15 CCK-8 法檢測(cè)B淋巴細(xì)胞的增殖能力32-33
• 2.2.16 ELISA法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子分泌量33
• 2.2.17統(tǒng)計(jì)分析33-34
• 3 結(jié)果與分析34-55
• 3.1 LfcinB和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞的影響34-45
• 3.1.1 Jurkat細(xì)胞的培養(yǎng)34-35
• 3.1.2 Lfcin H和Lfcin B對(duì)Jurkat細(xì)胞形態(tài)的影響35-37
• 3.1.3 Lfcin H和Lfcin B對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖率的影響37-38
• 3.1.4 Lfcin H和Lfcin B對(duì)Jurkat凋亡形態(tài)的影響38-40
• 3.1.5 Lfcin H和Lfcin B對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡率的影響40-44
• 3.1.6 Lfcin B和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的影響44-45
• 3.2 LfcinB和Lfcin H對(duì)巨噬細(xì)胞的影響45-47
• 3.2.1 Lfcin B和Lfcin H對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO的影響45-46
• 3.2.2 Lfcin B和Lfcin H對(duì)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α 的影響46-47
• 3.3 LfcinB和Lfcin H對(duì)脾淋巴細(xì)胞的影響47-55
• 3.3.1 Lfcin B和Lfcin H對(duì)脾淋巴細(xì)胞形態(tài)的影響47-49
• 3.3.2 Lfcin B和Lfcin H對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖率的影響49-51
• 3.3.3 Lfcin B和Lfcin H對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響51-55
• 4 討論55-62
• 4.1 LfcinB和Lfcin H體外抗癌作用的比較55-58
• 4.1.1 Lfcin B和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖抑制作用55-56
• 4.1.2 Lfcin B和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用56-57
• 4.1.3 Lfcin B和Lfcin H對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡機(jī)制的影響57-58
• 4.2 LfcinB和Lfcin H體外抗炎作用的比較58-59
• 4.2.1 Lfcin B和Lfcin H對(duì)巨噬細(xì)胞釋放NO的抑制作用58
• 4.2.2 Lfcin B和Lfcin H對(duì)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的抑制作用58-59
• 4.3 LfcinB和Lfcin H體外免疫調(diào)節(jié)作用的比較59-62
• 4.3.1 Lfcin B和Lfcin H對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖誘導(dǎo)作用59-60
• 4.3.2 Lfcin對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的抑制作用60-62
• 5 結(jié)論62-64
• 致謝64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文72

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉燕群;周宜開(kāi);王友潔;李華文;程晉鵬;郝巧玲;任恕;;2,3,7,8-四氯二苯并-p-二惡英誘導(dǎo)肺癌SPC-A1細(xì)胞凋亡的研究[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2005年06期

2 陳運(yùn)新;黃月紅;張莉娟;陳治新;王小眾;;白細(xì)胞介素-10基因修飾對(duì)大鼠肝細(xì)胞系BRL生長(zhǎng)的影響[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

3 James Dorcas Bolanle;Kadejo Olubukola Adetoro;Sallau Abdullahi Balarabe;Owolabi Olumuyiwa Adeyemi;;Hepatocurative potential of Vitex doniana root bark,stem bark and leaves extracts against CCl_4-induced liver damage in rats[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2014年06期

4 何佳;黃薇薇;孟慶森;姜艷平;崔文;喬薪瑗;葛俊偉;劉敏;李一經(jīng);唐麗杰;;表達(dá)豬乳鐵蛋白的重組乳酸乳球菌對(duì)斷奶仔豬應(yīng)用效果的研究[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2014年06期

5 張秀娟;李秋實(shí);季宇彬;;細(xì)胞死亡方式研究進(jìn)展[J];哈爾濱醫(yī)藥;2007年06期

6 趙高峰,僧靖靜,衛(wèi)戰(zhàn)文,田川,高冬玲,陳奎生,馬長(zhǎng)路,李全榮,齊宇,馬繼紅,屈清榮,張?jiān)茲h;食管鱗狀細(xì)胞癌組織中細(xì)胞脹亡與凋亡檢測(cè)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年06期

7 趙高峰,僧靖靜,劉文超,高冬玲,馬繼紅,孟紅印,韓立志,田川,胡偉,付明倜,屈清榮,張?jiān)茲h,李勝云;化療后肺鱗癌組織中細(xì)胞脹亡和凋亡檢測(cè)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年06期

8 鄧旭坤;蔡寶昌;徐珊;呂曉宇;殷武;項(xiàng)曉人;王明艷;;順鉑誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC7901和人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的比較[J];解剖學(xué)報(bào);2006年05期

9 蘇少輝;陳紀(jì)言;周穎玲;譚寧;余丹青;;西羅莫司洗脫支架預(yù)防再狹窄量效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J];嶺南心血管病雜志;2008年04期

10 ;In vitro Cytotoxicity of TCDD on SPC-A1 Cells[J];Biomedical and Environmental Sciences;2006年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭尹玲;從“濕熱變證”論治急性肝損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)制初探[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 呂順艷;血管鈉肽對(duì)低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞、心成纖維細(xì)胞以及血管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制調(diào)節(jié)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

3 徐鋒;梗阻性黃疸下大鼠肝缺血再灌注損傷肝細(xì)胞死亡方式及其防護(hù)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

4 杜曉宏;肝移植術(shù)后Ref-1對(duì)缺血再灌注致肝、腎、小腸和肺細(xì)胞DNA損傷修復(fù)作用的研究[D];吉林大學(xué);2006年

5 韓曉男;實(shí)驗(yàn)性肺氣腫、肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)理及中藥814防治的進(jìn)一步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

6 張旭晨;地鼠實(shí)驗(yàn)性肺氣腫、肺動(dòng)脈高壓某些發(fā)病機(jī)理探討及中藥肺舒靈防治作用的觀(guān)察[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

7 史耕先;6A8基因的功能研究：蛋白質(zhì)糖基化和淋巴細(xì)胞死亡[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

8 吳婷;依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

9 郝然;參麥注射液對(duì)心肌急性缺血缺氧損傷干預(yù)作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 賈志梅;雷米普利對(duì)大鼠非梗塞區(qū)心肌膠原及細(xì)胞凋亡的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 俞眉;人SDF-1α的原核表達(dá)、純化及其調(diào)控小鼠骨髓造血的實(shí)驗(yàn)研究[D];上海交通大學(xué);2007年

2 吳苗苗;氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺乏對(duì)泌乳小鼠乳腺與肌肉組織蛋白質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)影響的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 張兆美;CXCR7與VEGF在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

4 匡林華;葡萄糖對(duì)糖尿病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2014年

5 熊慧;體外誘導(dǎo)雞原始生殖細(xì)胞向精子分化的研究[D];佳木斯大學(xué);2014年

6 許雯;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及擴(kuò)增對(duì)其歸甾能力影響的機(jī)制初探[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

7 王婉瀟;白楊素衍生物的合成及抗腫瘤活性研究[D];天津科技大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：不同來(lái)源Lfcin的抗腫瘤、抗炎癥及免疫調(diào)節(jié)作用的對(duì)比研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：354573