目的:溴代阻燃劑多溴聯(lián)苯醚（Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs）的神經(jīng)毒性受到人們的廣泛關注,已有證據(jù)表明PBDEs神經(jīng)毒性與自噬異常有關,但具體作用機制尚不清楚。本研究旨在探討環(huán)境和人體中含量最多、毒性最強的PBDEs同系物之一的2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚（2,2’,4,4’-tetrabromodiphenylether,PBDE-47）對大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞瘤PC12細胞溶酶體功能和自噬流的影響,同時闡明轉錄因子EB（Transcription factor EB,TFEB）在PBDE-47致PC12細胞損傷中所扮演的角色,從而為進一步研究PBDEs神經(jīng)毒性的機制及治療提供實驗依據(jù)。方法:不同劑量PBDE-47（1、10、20μmol/L）處理PC12細胞24 h后,采用western blot檢測TFEB、溶酶體相關膜蛋白1（lysosome-associated membrane glycoprotein 1,LAMP1）、溶酶體內(nèi)和溶酶體外及總組織蛋白酶B（cathepsin B,Cat-B）、以及突觸體相關蛋白29（Synapt... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PBDE-47對溶酶體膜通透性的影響

圖 2 lysotracker 染色 PBDE-47 處理的 PC12 細胞2.3 PBDE-47 對 PC12 細胞溶酶體相關蛋白的影響不同劑量 PBDE-47（1 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L）處理 PC12 細胞后，western blot 檢測溶酶體相關蛋白 LAMP1、Cat-B 蛋白表達水平。結果如圖 3 所示，與對照組相比，10 μmol/L 及 20 μmol/L PBDE-47 染毒組中，LAMP1 蛋白表達水平顯著下降（P < 0.05），而 1 μmol/L、10 μmol/L 及 20 μmol/L PBDE-47 染毒組中，Cat-B 蛋白表達水平均顯著下降（P < 0.05）。表明 PBDE-47 可使溶酶體相關蛋白的表達水平下降。

圖 3 PBDE-47 對 PC12 細胞溶酶體相關蛋白的影響注：（a）LAMP1 蛋白條帶；（b）Cat-B 蛋白條帶；（c）LAMP1 蛋白表達水平統(tǒng)計圖；（d）Cat-B 蛋白表達水平統(tǒng)計圖。與對照組相比，*P < 0.05。2.4 PBDE-47 對 PC12 細胞自噬體與溶酶體融合的影響Ad-mCherry-GFP-LC3B 轉染 PC12 細胞后，不同劑量 PBDE-47（1 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L）處理 PC12 細胞。通過共聚焦顯微鏡觀察自噬體與溶酶體的融合情況，結果如圖 4 所示，對照組呈現(xiàn)出彌散的黃色熒光，隨著 PBDE-47 染毒濃度的增加，細胞體積縮小，彌散性黃光減少，紅色斑點變多，20 μmol/L PBDE-47組出現(xiàn)了明顯的黃色斑點。表明 PBDE-47 阻礙了自噬體與溶酶體的融合。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PBDEs研究的最新進展[J]. 羅孝俊,麥碧嫻,陳社軍.  化學進展. 2009(Z1)



本文編號：3403054