研究目的:金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病菌,其本身殺傷性不大,但在食品中大量繁殖之后可產(chǎn)生金黃色葡萄球菌腸毒素。金黃色葡萄球菌腸毒素對腸道破壞性大,常引起金黃色葡萄球菌腸炎,該病起病急,中毒癥狀嚴(yán)重,臨床癥狀主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹痛、腹瀉和休克等,嚴(yán)重可導(dǎo)致循環(huán)衰竭。目前,針對金黃色葡萄菌的實驗室檢測方法,主要有傳統(tǒng)分離培養(yǎng)生化鑒定法、免疫學(xué)檢測方法和分子生物學(xué)檢測方法。但這些方法存在著操作復(fù)雜、耗時長、靈敏性低、特異性差、對實驗條件和操作人員要求較高等缺點。因此,建立一種操作簡單、快速、靈敏且準(zhǔn)確的金黃色葡萄球菌的檢測方法對預(yù)防和控制由金黃色葡萄球菌引發(fā)的食品安全問題十分必要。本課題旨在通過卵黃抗體技術(shù)、免疫磁分離技術(shù)、TMB（3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺）-HRP（辣根過氧化物酶）-H₂O₂（過氧化氫）顯色體系,建立一種金黃色葡萄球菌快速可視化檢測方法,并對所建立的檢測方法進(jìn)行評價,為食品安全監(jiān)督防控提供一定的技術(shù)支撐。研究方法:1.金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定以金黃色葡萄球菌滅活菌液作為抗原,與弗氏完全佐劑/弗氏不完... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 金黃色葡萄球菌概述
        1.1.1 金黃色葡萄球菌微生物學(xué)特性
        1.1.2 金黃色葡萄球菌流行病學(xué)特性
        1.1.3 金黃色葡萄球菌的致病性及致病機(jī)理
    1.2 金黃色葡萄球菌檢測方法現(xiàn)狀
        1.2.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法
        1.2.2 免疫學(xué)方法
        1.2.3 分子生物學(xué)方法
    1.3 免疫磁分離技術(shù)
    1.4 卵黃抗體技術(shù)
    1.5 本實驗的研究目的、意義和創(chuàng)新點
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 相關(guān)試劑與耗材
        2.1.2 相關(guān)試劑的配制
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗菌株
    2.2 實驗方法
        2.2.1 金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定
        2.2.2 免疫磁珠的制備與表征
        2.2.3 金黃色葡萄球菌可視化檢測方法的建立
        2.2.4 金黃色葡萄球菌可視化檢測方法效果評價
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定
        3.1.1 雞卵黃抗體效價的測定
        3.1.2 雞卵黃抗體純度的鑒定
        3.1.3 雞卵黃抗體蛋白含量的鑒定
        3.1.4 雞卵黃抗體特異性的評價
    3.2 功能化羧基磁珠和免疫磁珠的表征
        3.2.1 透射電子顯微鏡表征結(jié)果
        3.2.2 紅外光譜表征結(jié)果
        3.2.3 磁力表征結(jié)果
    3.3 金黃色葡萄球菌可視化檢測方法的建立
        3.3.1 免疫磁珠用量和富集時間的優(yōu)化
        3.3.2 H_2O_2 用量的優(yōu)化
        3.3.3 H_2O_2 分解反應(yīng)時間的優(yōu)化
        3.3.4 顯色液pH值的優(yōu)化
        3.3.5 TMB溶液濃度的優(yōu)化
        3.3.6 HRP溶液濃度的優(yōu)化
    3.4 金黃色葡萄球菌可視化檢測方法的評價
        3.4.1 檢測限的確定
        3.4.2 準(zhǔn)確度的確定
        3.4.3 特異性的評價
        3.4.4 重復(fù)性的評價
        3.4.5 模擬樣的檢測以及加標(biāo)回收率的測定
第4章 討論
    4.1 雞卵黃抗體的制備與鑒定
    4.2 免疫磁珠的制備和表征
    4.3 TMB-HRP-H_2O_2 顯色體系
    4.4 檢測體系反應(yīng)條件的優(yōu)化
    4.5 模擬樣品的檢測
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌壁磷壁酸結(jié)構(gòu)、功能及其糖基化修飾概述[J]. 熊夢園,李一榮.  武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2020(03)
[2]一起由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病原溯源[J]. 李曉路,遇婷,廖文,張巍,何穎,祝琳.  中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué). 2019(12)
[3]一起由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒檢測分析[J]. 黃彬紅,蔡津霖,莊一鳴.  按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué). 2019(22)
[4]聯(lián)合環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)和橫向流動試紙條檢測金黃色葡萄球菌[J]. 陳歡,余蓓蓓,黃世旺,徐昌平,毛爭爭.  預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(04)
[5]2015年中國大陸食源性疾病暴發(fā)事件監(jiān)測資料分析[J]. 付萍,王連森,陳江,白光大,徐粒子,王帥,郭云昌.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2019(01)
[6]一起由金黃色葡萄球菌及其腸毒素引發(fā)食物中毒的實驗室檢測與分析[J]. 欒陽,張曄,張金,黃河清,王增國.  醫(yī)學(xué)動物防制. 2018(11)
[7]環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增微流控檢測方法研究進(jìn)展[J]. 殷宏,湯小玉,薛強(qiáng),鄒明強(qiáng).  檢驗檢疫學(xué)刊. 2018(03)
[8]食品安全中食源性致病菌現(xiàn)代檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 張鵬輝,郭夢冉,耿鳳珍,檀建新.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(09)
[9]金黃色葡萄球菌菌膜形成過程中過氧化氫酶變化的研究[J]. 楊存迪,李忠海,任佳麗.  食品與機(jī)械. 2017(04)
[10]副溶血性弧菌高免卵黃抗體的制備和不同提純方法效果的比較[J]. 翟玥,曲笑鋒,龐博,李麗,徐坤,王夢涵,高孜博,宋佳音,宋秀玲,金明華.  吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(02)

博士論文
[1]三種人獸共患病病原菌同步快速檢測技術(shù)研究[D]. 李麗.吉林大學(xué) 2017

碩士論文
[1]食品中布魯氏菌快速檢測方法的建立及效果評價[D]. 宋丹丹.吉林大學(xué) 2017
[2]金黃色葡萄球菌生物被膜相關(guān)基因型及其分子進(jìn)化規(guī)律的研究[D]. 劉曉晨.華南理工大學(xué) 2015



本文編號：3367394