目的:類金屬元素砷是一種環(huán)境氧化應激物,長期暴露可以導致皮膚病變和多種實質(zhì)性臟器損害,還能誘導多種惡性腫瘤的發(fā)生。另外,大量人群流行病學研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境砷暴露與2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關。2型糖尿病的病理生理基礎是胰島素合成及分泌受損和胰島素抵抗。胰島β細胞合成和分泌胰島素,其功能障礙是糖尿病病人血糖升高的直接原因之一。因此,研究胰島β細胞的功能在闡明砷致糖尿病的病理機制中至關重要,具有重要的公共衛(wèi)生學意義。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)MIN6胰島β細胞中的核轉(zhuǎn)錄因子NRF1（Nuclear factor E2-related factor 1,也稱NFE2L1）長亞型缺失對急性砷暴露引起的細胞損傷更敏感,提示長亞型NRF1在砷導致胰島β細胞急性損傷過程中起到了重要的保護作用。小鼠Nrf1基因可轉(zhuǎn)錄生成多個轉(zhuǎn)錄本,翻譯生成多種蛋白亞型,但這些亞型在砷暴露的胰島β細胞中表達尚不明確,我們通過檢測三價無機砷暴露對胰島β細胞中各亞型Nrf1的表達,發(fā)現(xiàn)其短亞型升高明顯,因此本研究課題的開展將以短型NRF1為中心,旨在探討其在急性三價無機砷暴露導致胰島β細胞損傷中的作用及機制。研究方法:利用RT-qPC... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠Nrfl基因組序列及不同亞型結(jié)構的示意圖

中國醫(yī)科大學碩士學位論文143.2iAs3+誘導胰島β細胞中細胞核內(nèi)短型NRF1的積累如圖3.2所示，分別用10μMiAs3+對MIN6細胞進行時間-效應處理，和用0-20μMiAs3+對MIN6細胞進行6h劑量-效應處理，隨后應用針對各亞型的特異性q-PCR引物，對iAs3+誘導的Nrf1各亞型基因表達進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，iAs3+能整體上誘導Nrf1基因表達升高，其中，相比較長型的改變，兩種短型升高的趨勢更加明顯。圖3.2iAs3+誘導MIN6胰島β細胞Nrf1的mRNA表達MIN6細胞急性iAs3+暴露后Nrf1各亞型mRNA表達情況，時間效應上染毒劑量為10μM，劑量效應處理時間為6h。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示（n=3）；組間比較采用雙因素方差分析；*表示與對照組相比，P<0.05。然后我們收集樣品對不同劑量和時間iAs3+處理后的NRF1蛋白表達進行檢測，也得到了同樣的結(jié)論，在圖3.3中，與120kDa條帶相比，65kDa，85-95kDa的短型NRF1條帶在iAs3+處理后均明顯加深。提示在MIN6細胞系中，急性砷處理能顯著誘導短型NRF1的蓄積，并且這種蛋白的增加是由于基因的轉(zhuǎn)錄翻譯而產(chǎn)生，這為我們后面探討其升高的機制提供了思路。另外，糖基化和蛋白水解加工等翻譯后修飾過程在Nrf1的多種亞型反式激活和穩(wěn)定中起著重要的作用，因此長型NRF1在急性砷暴露后的改變可能存在多種影響因素。

中國醫(yī)科大學碩士學位論文15圖3.3iAs3+誘導MIN6胰島β細胞NRF1的蛋白表達分析MIN6細胞急性iAs3+暴露后NRF1蛋白表達情況。時間效應上（左圖）染毒劑量為10μM，劑量效應（右圖）處理時間為6h。β-ACTIN作為內(nèi)參。接下來我們想探討急性iAs3+處理對小鼠原代胰島細胞中Nrf1的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠胰島中短型Nrf1的mRNA（如圖3.4（A）所示）的表達水平在10μMiAs3+暴露6h后增加明顯，結(jié)果同MIN6細胞系一致。蛋白（如圖3.4（B）所示），65kDa條帶位置iAs3+處理后顏色更深，位置約85-95kDa的條帶在iAs3+處理后略有升高。圖3.4iAs3+誘導小鼠原代胰島中短型Nrf1的蓄積A：小鼠原代胰島細胞急性iAs3+暴露后Nrf1各亞型mRNA表達情況，染毒劑量和時間分別為10μM，6h。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示（n=3）；組間比較采用雙因素方差分析；*表示與Veh組相比，P<0.05；B：小鼠原代胰島細胞急性iAs3+暴露后NRF1蛋白表達情況。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;.  中國實用內(nèi)科雜志. 2018(04)
[2]砷代謝研究在解析砷毒性作用機制中的意義[J]. 孫貴范.  中國地方病學雜志. 2009 (01)

博士論文
[1]亞砷酸鈉對胰島β細胞功能的影響及其機制研究[D]. 富景奇.中國醫(yī)科大學 2010



本文編號：3327200