本文關(guān)鍵詞：重組Lac Z酵母細(xì)胞構(gòu)建及對(duì)化學(xué)誘變?cè)母咄亢Y選研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：基因毒性(Genotoxic)是指能直接或間接損傷細(xì)胞DNA的性質(zhì)。誘變?cè)淳哂谢蚨拘宰饔玫幕衔?它能夠改變機(jī)體細(xì)胞遺傳物質(zhì)而誘發(fā)突變。當(dāng)今,化學(xué)誘變?cè)殉蔀槲：Νh(huán)境和人類(lèi)健康的一大類(lèi)因素,防止這類(lèi)化學(xué)污染物對(duì)環(huán)境污染成為人類(lèi)預(yù)防癌癥的重要手段之一。目前,人們已經(jīng)提出多種對(duì)致突變化學(xué)誘變?cè)拘栽u(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法,如Ames試驗(yàn)、微核和染色體試驗(yàn)等。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,一些常規(guī)的評(píng)價(jià)檢測(cè)方法的缺點(diǎn)逐漸突顯出來(lái)：敏感度低,耗時(shí)較長(zhǎng),操作繁瑣以及成本過(guò)高等方面成為了影響對(duì)化學(xué)誘變?cè)拘栽u(píng)價(jià)的因素。本課題利用生物傳感器技術(shù),與其中的微生物傳感器技術(shù)相結(jié)合,用重組的酵母細(xì)胞作為宿主細(xì)胞,用Lac Z作用為報(bào)告基因,利用經(jīng)化學(xué)誘變?cè)饔煤蟊磉_(dá)產(chǎn)物可催化底物顯色這一特性,特性作為信號(hào)轉(zhuǎn)換的標(biāo)識(shí),評(píng)價(jià)致突變化學(xué)物的毒性作用強(qiáng)度。化學(xué)誘變物主要分為兩類(lèi)：直接化學(xué)誘變物和間接化學(xué)誘變物,前者對(duì)DNA具有直接損傷作用,后者自身對(duì)DNA無(wú)損傷作用,但其進(jìn)入機(jī)體內(nèi)可經(jīng)某些反應(yīng)轉(zhuǎn)化為具有基因毒性作用的物質(zhì)。本課題利用構(gòu)建重組酵母細(xì)胞分別對(duì)直接和間接化學(xué)誘變物進(jìn)行高通量篩選研究。1.重組酵母細(xì)胞W303-1A/RNR3-LacZ的構(gòu)建及對(duì)直接誘變物的篩選目的：建立由RNR3調(diào)控重組Lac Z基因酵母細(xì)胞以篩選直接化學(xué)誘變物。方法：利用PCR方法從酵母基因組中擴(kuò)增RNR3啟動(dòng)子,將其插入到pMP206/ERE酵母報(bào)告載體,構(gòu)建成RNR3調(diào)控的Lac Z酵母報(bào)告載體,將該載體轉(zhuǎn)入W303-1A酵母細(xì)胞,構(gòu)建成RNR3調(diào)控的重組Lac Z基因酵母細(xì)胞。用數(shù)種化學(xué)誘變?cè)饔糜谠撝亟M基因酵母細(xì)胞,觀察其對(duì)RNR3的誘導(dǎo)表達(dá),用Excel軟件進(jìn)行分析。結(jié)果：放線菌素D、絲裂霉素C、阿非迪霉素和溴乙錠不能誘導(dǎo)RNR3的表達(dá),而甲磺酸甲脂、瘤可寧、順鉑、4-硝基-N-氧化喹啉、博來(lái)霉素、福來(lái)霉素、5-氟尿嘧啶、喜樹(shù)堿和羥基脲誘變?cè)cRNR3表達(dá)有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論：該重組酵母可用于對(duì)多種化學(xué)誘變?cè)目焖俸Y選。2.重組酵母細(xì)胞W303-1A/RNR3-LacZ/GPDV5-CYP1A1的構(gòu)建及對(duì)間接誘變物的篩選目的：建立由RNR3調(diào)控重組Lac Z基因及可表達(dá)CYP1A1基因的重組酵母細(xì)胞以篩選間接化學(xué)誘變物。方法：利用PCR方法從GV142質(zhì)粒上擴(kuò)增CYP1A1基因,將其插入到pGPDV5酵母表達(dá)載體上,構(gòu)建成PGPDV5-CYP1A1酵母表達(dá)載體,將該載體轉(zhuǎn)入所建立的W303-1A/RNR3-Lac Z重組酵母細(xì)胞,構(gòu)建成可表達(dá)CYP1A1及受RNR3調(diào)控的Lac Z基因酵母細(xì)胞。用Promega公司的試劑盒檢測(cè)CYP1A1表達(dá),并用間接誘變?cè)?-氨基芴作用于該重組基因酵母細(xì)胞,觀察其對(duì)RNR3的誘導(dǎo)表達(dá),用Excel軟件進(jìn)行分析。結(jié)果：DNA測(cè)序表明pGPDV5-CYP1A1酵母表達(dá)載體構(gòu)建成功,并經(jīng)PCR鑒定已經(jīng)成功重組于酵母細(xì)胞,但經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CYP1A1活性較低,細(xì)胞經(jīng)2-氨基芴作用后,與Lac Z表達(dá)無(wú)明顯時(shí)間劑量效應(yīng)。結(jié)論：CYP1A1表達(dá)量不足,可能在轉(zhuǎn)錄或翻譯過(guò)程中受到某些因素的阻斷,導(dǎo)致該重組酵母細(xì)胞不能很好的篩選間接誘變?cè)?其原因還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：化學(xué)誘變?cè)?/strong> 酵母 β-半乳糖苷酶 Lac Z基因 CYP1A1
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要2-4
• 英文摘要4-8
• 第一章 文獻(xiàn)綜述8-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 符號(hào)說(shuō)明16-17
• 第二章 直接誘變?cè)暮Y選17-38
• 1. 材料與方法17-29
• 2. 結(jié)果29-38
• 第三章 間接誘變?cè)暮Y選38-56
• 1. 材料與方法38-49
• 2. 結(jié)果49-56
• 討論56-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄64-65

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  本文關(guān)鍵詞：重組Lac Z酵母細(xì)胞構(gòu)建及對(duì)化學(xué)誘變?cè)母咄亢Y選研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：327585

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