四氯苯醌（TCBQ）過去常被用作防腐劑和農(nóng)藥產(chǎn)品,它可通過食物鏈進入生物體而損害機體健康。本課題組之前報道指出TCBQ能誘導HepG2細胞產(chǎn)生活性氧和細胞遺傳毒性,但其是否具有神經(jīng)毒性尚未有研究,所以明確其毒性及機制為尋找新的減毒措施,指導臨床合理用藥具有重要意義。醌類結(jié)構的物質(zhì)在體內(nèi)的氧化還原過程會產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）,進而發(fā)生氧化應激反應,引起酶、氨基酸、蛋白質(zhì)的氧化破壞,從而引起機體疾病如衰老、腫瘤、突變及炎癥等。ROS影響著細胞的生化過程,是誘導細胞凋亡的一個重要因子。細胞凋亡是一種主動的過程,是細胞對環(huán)境的生理性病理性刺激信號,環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應答有序變化的死亡過程。其與多細胞生物的發(fā)育、分化、穩(wěn)態(tài)維持及某些疾病發(fā)生等多種生命活動都密切相關。細胞凋亡主要包括三條信號轉(zhuǎn)導通路：死亡受體途徑、線粒體依賴途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。大鼠腎上腺嗜鉻骨髓瘤細胞（PC12細胞）被廣泛用于神經(jīng)生物學和神經(jīng)毒理學的研究,因此本文選用PC12細胞作為研究對象。首先采用AO/EB染色鑒別凋亡壞死,DAPI, Hoechst染色鑒別不同濃度的TCBQ對于細胞形態(tài)的影響。用JC-1熒光探... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號對照表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 四氯苯醌
        1.2.1 四氯苯醌的性質(zhì)
        1.2.2 四氯苯醌的應用
    1.3 活性氧簡介
    1.4 細胞凋亡
        1.4.1 受體依賴的細胞凋亡的信號傳導通路(外部通路)
        1.4.2 線粒體依賴的細胞凋亡的信號傳導通路(內(nèi)部通路)
        1.4.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路
    1.5 Caspase 8/t-Bid通路
        1.5.1 Caspase 8
        1.5.2 Bid
    1.6 立題依據(jù)和意義
第二章 四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid誘導PC12細胞凋亡
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器和設備
        2.2.3 主要溶劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)、凍存和復蘇
        2.3.2 細胞存活率
        2.3.3 乳酸脫氫酶活性的檢測
        2.3.4 細胞形態(tài)觀察
        2.3.5 線粒體膜電位(MMP)檢測
        2.3.6 Annexin V-FITC/PI方法檢測細胞凋亡
        2.3.7 免疫熒光雙染實驗
        2.3.8 細胞蛋白提取
        2.3.9 Western blot實驗
        2.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 TCBQ對于PC12細胞存活率的影響
        2.4.2 TCBQ對PC12細胞乳酸脫氫酶的影響
        2.4.3 TCBQ誘導PC12細胞凋亡
        2.4.4 TCBQ通過激活線粒體通路誘導細胞凋亡
        2.4.5 TCBQ通過激活死亡受體通路誘導細胞凋亡
        2.4.6 TCBQ通過t-Bid表達而激活內(nèi)外凋亡通路
        2.4.7 Caspase 8抑制劑對TCBQ誘導凋亡的影響
    2.5 討論
第三章 ROS在caspase 8/t-Bid通路中的作用及機制研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 溶劑與試劑
        3.2.2 主要儀器和設備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 ROS的檢測
        3.3.2 GSH含量的測定
        3.3.3 MDA含量的測定
        3.3.4 蛋白質(zhì)羰基含量的測定
        3.3.5 抗氧化劑NAC對死亡受體通路的影響
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 TCBQ誘導ROS的產(chǎn)生
        3.4.2 TCBQ對細胞中GSH含量的影響
        3.4.3 TCBQ對細胞中MDA含量的影響
        3.4.4 TCBQ對細胞中蛋白質(zhì)羰基含量的影響
        3.4.5 抗氧化劑NAC抑制死亡受體通路的激活
    3.5 討論
參考文獻
致謝
作者攻讀碩士學位期間已發(fā)表的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)羰基化與衰老[J]. 李國林,印大中.  中國老年學雜志. 2008(20)
[2]三丁基錫（TBT）對羅非魚兩組織SOD和GSH的影響[J]. 馬曉燕,范立民,甘居利,胡庚東,瞿建宏,陳家長.  安全與環(huán)境學報. 2007(04)
[3]細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導途徑及調(diào)控的研究進展[J]. 王德成,高洪.  動物醫(yī)學進展. 2003(06)
[4]四氯苯醌的綜合利用[J]. 陳光雨.  染料工業(yè). 1982(06)



本文編號：3248856