目的:本研究以氟砷聯(lián)合染毒成骨與破骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系為研究對(duì)象,以RANK/TRAF-6/NF-κB1信號(hào)通路相關(guān)基因、蛋白的表達(dá)以及對(duì)破骨細(xì)胞骨吸收功能因子的檢測來初步探討氟、砷致骨相損傷的分子機(jī)制。方法:1.用成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后的小鼠顱頂前成骨細(xì)胞MC3T3-E1與單核巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞建立共培養(yǎng)體系,培養(yǎng)7d后,經(jīng)抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鑒定破骨細(xì)胞。2.細(xì)胞活力的檢測:在RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化后,用含不同濃度的氟化鈉（sodium fluoride,NaF）或亞砷酸鈉（sodium arsenite,NaAsO₂）的培養(yǎng)基換液染毒,氟劑量為0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mmolF^-/L,砷劑量為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μmolAs³⁺/L,分別染毒24h后,用CCK-8法測細(xì)胞相對(duì)存活率,探討氟、砷對(duì)破骨細(xì)胞的毒性。3.劑量組別的設(shè)計(jì):根據(jù)上述細(xì)胞活力檢測結(jié)果,選擇氟和砷的染毒劑量分別為4個(gè)劑量組:即氟化鈉（NaF）為0、0... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

光鏡下MC3T3-E1和RAW264.7細(xì)胞及誘導(dǎo)后染色結(jié)果

則判定為拮抗作用；（氟×砷效應(yīng)）=氟效應(yīng)+砷效應(yīng)則判定為相加作用。并分析交互作用屬于何種類型。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。2 結(jié) 果2.1 氟、砷染毒對(duì)共培養(yǎng)體系中成骨與破骨細(xì)胞的毒性2.1.1 氟、砷染毒 24 小時(shí) CCK-8 檢測染氟組、染砷組的組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=33.098、F=154.496，P 均<0.05），見圖 1。與對(duì)照組相比，當(dāng) NaF 濃度為 1.6mmol/L、NaAsO2濃度為 4μmol/L時(shí) ，細(xì)胞活性明顯降低（P 均<0.05），隨著濃度進(jìn)一步增高，細(xì)胞活性呈濃度依賴性降低，其活性分別為 75.84%和 81.82%；隨著染氟和染砷濃度增加，細(xì)胞活性成濃度依賴性降低�？紤]聯(lián)合染毒可能會(huì)增加細(xì)胞毒性，因此本實(shí)驗(yàn)后續(xù)研究的（分別以 0、0.1、0.4、1.6 mmol/L NaF 和 0、0.5、2.5、12.5μmol/L NaAsO2等比數(shù)列分組）最高濃度為 NaF 1.6mmol/L 和 NaAsO212.5μmol/L 。

圖 2-2 氟砷染毒共培養(yǎng)體系中上清液 OPG/RANKL 蛋白比值-2OPG/RANKL protein ratio of supernatant in the co-culture systemfluorine and arsenic表 2-5 OPG、RANKL 蛋白及 mRNA 相對(duì)表達(dá)量的氟砷交互作用.2-5 Fluorine - arsenic interaction analysis of OPG, RANKL protein expression式OPG 蛋白 RANKL 蛋白 OPG mRNA RAF P F P F P 7.57 0.01*7.38 0.01*126.14 0.00*1719.86 0.00*10.22 0.00*302.90 0.00*3s 4.93 0.00*11.61 0.00*117.49 0.00*1P<0.05。、 砷及氟砷聯(lián)合對(duì) RANK/TRAF-6/NF-κB1 通路及骨吸收


本文編號(hào)：3073834