本文關(guān)鍵詞：可視化抗體宏陣列技術(shù)對(duì)腸出血性大腸桿菌O157:H7及鮑氏志賀氏菌的同步定量檢測(cè)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著國(guó)家《食品中致病菌限量》標(biāo)準(zhǔn)的頒布，我國(guó)食源性致病菌的檢測(cè)將從原來(lái)的零檢出變成部分生鮮食物原料限量檢出，這也對(duì)目前快速檢測(cè)領(lǐng)域提出了新要求，現(xiàn)行國(guó)標(biāo)方法的定量檢測(cè)均為平板計(jì)數(shù)，相對(duì)較為耗時(shí)費(fèi)力，本研究旨在探索一種基于蛋白質(zhì)芯片的高通量快速定量檢測(cè)方法，為食源性致病菌檢測(cè)提供一條新思路。 本研究以免疫學(xué)中“雙抗體夾心”法原理為基礎(chǔ)，基于可視化抗體宏陣列技術(shù)，對(duì)腸出血性大腸桿菌O157:H7和鮑氏志賀氏菌完成同步快速定量檢測(cè)。 以微孔性質(zhì)的硝酸纖維素膜為載體基片，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程均在此基片上完成。將目標(biāo)細(xì)菌的特異性抗體以噴點(diǎn)的方式固定在基片表面，組成抗體陣列，用于檢測(cè)樣品中的目標(biāo)細(xì)菌，，再加入HRP標(biāo)記過(guò)的另一種特異性抗體，最后通過(guò)化學(xué)顯色方法確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。之后通過(guò)成像、分析檢測(cè)點(diǎn)灰度值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，推算樣品中致病菌的含量。 結(jié)果顯示，可視化抗體宏陣列對(duì)腸出血性大腸桿菌O157:H7和鮑氏志賀氏菌有很好的特異性識(shí)別作用，對(duì)這兩種細(xì)菌的檢測(cè)靈敏度分別達(dá)到了3.4×105CFU/mL和3.2×105CFU/mL，兩者相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的也較為理想，三次平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果之間的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于一般ELISA實(shí)驗(yàn)所要求的10%，充分說(shuō)明了標(biāo)準(zhǔn)曲線的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。雙檢模擬增菌定量檢測(cè)的結(jié)果顯示，只有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線推算結(jié)果與平板計(jì)數(shù)結(jié)果相差一個(gè)數(shù)量級(jí)，其余標(biāo)準(zhǔn)曲線推算的結(jié)果均與平板計(jì)數(shù)結(jié)果在同一數(shù)量級(jí)之上，從而論證了本研究的可行性。之后與傳統(tǒng)的ELISA以及PCR方法進(jìn)行比較，在靈敏度上三者均一致，相比于后兩者，本研究耗時(shí)僅為2.5h，同時(shí)可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，在食源性致病菌快速定量檢測(cè)上取得了一定進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：可視化 抗體宏陣列 食源性致病菌 定量檢測(cè) 蛋白質(zhì)芯片
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-8
• 文獻(xiàn)綜述8-16
• 1. 前言16-17
• 2. 材料與方法17-25
• 2.1 主要材料與試劑17-18
• 2.2 主要儀器設(shè)備18-19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)菌懸液的制備19
• 2.3.2 O157Mab 與 SHBMab 的 HRP 標(biāo)記19-20
• 2.3.3 可視化抗體宏陣列的構(gòu)建20-21
• 2.3.4 抗體宏陣列的“雙抗體夾心”法檢測(cè)21
• 2.3.5 O157Pab 與 SHBPab 最佳點(diǎn)樣濃度的選擇21-22
• 2.3.6 硝酸纖維素膜的選擇22
• 2.3.7 O157 抗體宏陣列的構(gòu)建22-23
• 2.3.8 SHB 抗體宏陣列的構(gòu)建23
• 2.3.9 O157 與 SHB 雙檢抗體宏陣列的構(gòu)建23-25
• 3. 結(jié)果與分析25-47
• 3.1 結(jié)果25-44
• 3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌懸液的制備25
• 3.1.2 兩種 HRP 標(biāo)記的單克隆抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果25-26
• 3.1.3 兩種捕獲抗體最佳濃度的選擇26-27
• 3.1.4 抗體宏陣列基片的選擇27-28
• 3.1.5 腸出血性大腸桿菌 O157:H7 抗體宏陣列的構(gòu)建28-34
• 3.1.6 鮑氏志賀氏菌抗體宏陣列的構(gòu)建34-39
• 3.1.7 腸出血性大腸桿菌 O157:H7 與鮑氏志賀氏菌的同步檢測(cè)39-44
• 3.2 兩種傳統(tǒng)快速檢測(cè)方法對(duì) O157 和 SHB 的靈敏度44-45
• 3.2.1 PCR 方法對(duì) O157 和 SHB 的檢測(cè)靈敏度44-45
• 3.2.2 ELISA 方法對(duì) O157 和 SHB 的檢測(cè)靈敏度45
• 3.3 分析45-47
• 3.3.1 抗體宏陣列基片的選擇45
• 3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合45-46
• 3.3.3 模擬增菌定量檢測(cè)46-47
• 4. 討論47-49
• 4.1 實(shí)驗(yàn)部分47-48
• 4.2 小結(jié)48-49
• 5. 結(jié)論49-50
• 致謝50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 作者簡(jiǎn)介56-57
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介57-58

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  本文關(guān)鍵詞：可視化抗體宏陣列技術(shù)對(duì)腸出血性大腸桿菌O157:H7及鮑氏志賀氏菌的同步定量檢測(cè)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：305007