目的為實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因甜菜GTSB77的標(biāo)識(shí)管理,建立其品系特異性實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)方法。方法針對(duì)GTSB77的3’端外源插入片段與甜菜基因組DNA之間的鄰接區(qū)序列設(shè)計(jì)引物和探針,建立GTSB77品系特異性實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法,并對(duì)該方法的特異性、靈敏度和重復(fù)性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果建立的GTSB77檢測(cè)方法特異性強(qiáng),定量限（LOQ）為16拷貝,擴(kuò)增效率為102%,重復(fù)性測(cè)試結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）介于0. 21%～1. 66%之間。結(jié)論建立的實(shí)時(shí)熒光PCR方法可應(yīng)用于GTSB77的鑒定檢測(cè)。 

【文章來源】：中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2020,32(01)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

GTSB77外源插入片段示意圖

GTSB77特異性序列

圖2 GTSB77特異性序列品系特異性實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系(25μl):Premix Ex TaqTM12.5μl,ROX Reference Dye II 0.2μl,10μmol/L上下游引物各0.5μl,10μmol/L檢測(cè)探針0.5μl,DNA模板2μl,dd H2O8.3μl。反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性30 s;95℃變性5 s、60℃退火延伸34 s,40個(gè)循環(huán)，于60℃收集熒光信號(hào)。


本文編號(hào)：2992829