本文關(guān)鍵詞：DEHP宮內(nèi)暴露對小鼠睪丸生殖毒性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯(DEHP)是一種常用塑化劑,因其對自然環(huán)境和人體健康有許多不利影響而受到廣泛關(guān)注。DEHP廣泛存在于各種塑料制品中,如食品包裝、兒童玩具、醫(yī)療產(chǎn)品、建筑材料和汽車用品等。DEHP與塑料基質(zhì)之間是非共價鍵結(jié)合,經(jīng)常使用或者受熱可以溢出,進入環(huán)境,造成環(huán)境污染。DEHP可以通過吸入、攝入、注射、皮膚接觸等途徑進入人體,影響人類的身體健康。研究發(fā)現(xiàn),DEHP能引起神經(jīng)毒性、免疫毒性、胚胎毒性和生殖毒性等,其中生殖毒性尤為顯著。睪丸作為雄性動物生殖器官,其主要功能是產(chǎn)生精子和雄性激素,維持男性生殖功能。睪丸是DEHP生殖毒性的靶器官,研究發(fā)現(xiàn)DEHP暴露會引起隱睪及類似人類睪丸發(fā)育不全綜合征的癥狀等雄性生殖損傷。為研究DEHP對F1代小鼠睪丸的生殖毒性作用,本實驗通過腹腔注射途徑建立DEHP宮內(nèi)暴露引起的子代雄鼠生殖毒性模型,從組織形態(tài)、激素調(diào)節(jié)和細胞凋亡三個方面探討DEHP對睪丸的毒性作用。DEHP染毒時間為孕期第13天到孕期第19天,DEHP濃度分別為62.5、125、250和375mg/kg/day,對照組注射等量橄欖油。記錄孕鼠產(chǎn)仔數(shù)量、子代小鼠雌雄比例,稱量F1代40日齡、60日齡、90日齡雄性小鼠體重,睪丸濕重,檢測F1代90日齡雄性小鼠精子畸形率。通過放射免疫分析檢測F1代40日齡、60日齡、90日齡雄性小鼠血清中T、E、LH、FSH水平。Weston blot檢測F1代小鼠睪丸中睪酮合成相關(guān)酶Star和Cyp17a1的表達情況。制作F1代小鼠睪丸石蠟切片,對90日齡F1代小鼠睪丸組織石蠟切片進行HE染色,觀察睪丸組織形態(tài)變化。TUNEL檢測觀察F1代小鼠睪丸內(nèi)細胞凋亡情況。免疫組織化學檢測雄激素結(jié)合蛋白、促凋亡蛋白P53在睪丸中的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)DEHP導致F1代40日齡雄性小鼠睪丸濕重上升,精子畸形率上升,F1代與F2代小鼠雌雄比例上升。睪丸組織石蠟切片HE染色發(fā)現(xiàn)睪丸曲細精管中出現(xiàn)空泡化、多核細胞、不正常細胞團塊,睪丸中曲細精管之間的間隙變大,生精細胞層缺失,生精周期紊亂等。(2)DEHP造成40、60和90日齡F1代雄性小鼠血清睪酮(T)水平下降,60日齡F1代雄性小鼠血清雌二醇(E)水平上升,40日齡和60日齡血清促黃體生成素(LH)水平上升,60日齡、90日齡小鼠睪丸組織中雄激素結(jié)合蛋白(ABP)濃度異常。(3)DEHP能誘導睪丸中生精細胞和支持細胞凋亡,隨劑量增加,凋亡細胞明顯增加。結(jié)果表明,宮內(nèi)暴露DEHP可能通過影響胚胎發(fā)育,造成下丘腦-腺垂體-睪丸軸紊亂,引起性激素濃度異常,從而引起子代小鼠雌雄比例升高和睪丸發(fā)育異常,并且這種異常在胚胎發(fā)育過程中逐漸表現(xiàn)出來,導致精子畸形率上升,睪丸組織結(jié)構(gòu)異常,破壞生精過程,誘導生精細胞和支持細胞凋亡,造成睪丸雄性生殖損傷。本研究初步研究DEHP生殖毒性機制,為進一步深入研究DEHP的生殖毒性機制提供理論借鑒。
【關(guān)鍵詞】：DEHP 睪丸毒性 抗雄作用 血清激素 細胞凋亡
【學位授予單位】：山東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 論文綜述11-27
• 1 睪丸結(jié)構(gòu)及功能11-19
• 1.1 睪丸的形態(tài)結(jié)構(gòu)11-12
• 1.2 睪丸間質(zhì)細胞12-14
• 1.2.1 睪丸間質(zhì)細胞發(fā)育12-13
• 1.2.2 睪丸間質(zhì)細胞功能13-14
• 1.3 睪丸支持細胞14-16
• 1.3.1 睪丸支持細胞發(fā)育14
• 1.3.2 睪丸支持細胞功能14-16
• 1.4 精子發(fā)生16-17
• 1.4.1 精原干細胞的增殖與更新16
• 1.4.2 精母細胞減數(shù)分裂形成單倍體的精子細胞16-17
• 1.4.3 精子形成17
• 1.5 生精上皮周期17-18
• 1.6 精子發(fā)生的調(diào)節(jié)18-19
• 2 DEHP及其毒性19-27
• 2.1 DEHP概述19-20
• 2.2 DEHP暴露20-21
• 2.3 DEHP代謝21
• 2.4 DEHP毒性21-25
• 2.4.1 DEHP對肝、肺的毒性21-22
• 2.4.2 DEHP的神經(jīng)毒性22
• 2.4.3 DEHP的胚胎發(fā)育毒性22-23
• 2.4.4 DEHP的生殖毒性23-25
• 2.5 DEHP雄性毒性的敏感階段25
• 2.6 DEHP導致雄性雌性化主要檢測指標25-27
• 第二章 研究論文27-55
• 1 引言27
• 2 實驗材料與方法27-37
• 2.1 實驗材料27
• 2.2 實驗試劑與配制27-30
• 2.2.1 實驗試劑27-29
• 2.2.2 實驗試劑的配制29-30
• 2.3 實驗儀器30-31
• 2.4 實驗方法31-37
• 2.4.1 孕鼠準備31
• 2.4.2 實驗分組和染毒方法31
• 2.4.3 F2代小鼠的獲取31-32
• 2.4.4 血清的獲取32
• 2.4.5 精子涂片制作32
• 2.4.6 睪丸組織石蠟切片制作32-33
• 2.4.7 血清中激素水平檢測33
• 2.4.8 睪丸組織石蠟切片HE染色33-34
• 2.4.9 睪丸組織石蠟切片免疫組化34-35
• 2.4.10 睪丸組織石蠟切片TUNEL實驗35
• 2.4.11 蛋白印跡實驗（Western blot）35-36
• 2.4.12 統(tǒng)計分析36-37
• 3 實驗結(jié)果37-49
• 3.1 DEHP抗雄性作用常規(guī)指標檢測結(jié)果37-41
• 3.1.1 DEHP對F1代小鼠體重、睪丸濕重的影響37-38
• 3.1.2 DEHP對F0代、F1代小鼠產(chǎn)仔數(shù)量的影響38
• 3.1.3 DEHP對F1代、F2代小鼠雌雄比例的影響38-39
• 3.1.4 DEHP對F1代小鼠精子畸形率的影響39-40
• 3.1.5 DEHP對睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響40-41
• 3.2 DEHP對性激素水平及激素相關(guān)蛋白表達的影響41-45
• 3.2.1 DEHP對血清中性激素水平的影響41-43
• 3.2.2 DEHP對睪丸組織中雄激素結(jié)合蛋白（ABP）表達的影響43-45
• 3.2.3 DEHP對睪酮合成相關(guān)基因（Star、Cyp17a1）表達的影響45
• 3.3 DEHP對睪丸生精細胞凋亡的影響45-49
• 4 討論與分析49-55
• 參考文獻55-59
• 致謝59

【相似文獻】

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本文編號：293210