電離輻射能夠?qū)е录毎鸇NA斷裂,引起基因表達發(fā)生變化,同時還能引起全身性的生理生化指標的變化。輻射后機體和分子的變化可用于估算生物受照劑量進而發(fā)展成生物劑量計。現(xiàn)有生物劑量計不能滿足高通量快速檢測的要求,本文以小鼠外周血和小鼠血清為樣本分別利用RT-PCR技術(shù)和非標記表面增強拉曼光譜（SERS）檢測技術(shù),分別從輻射敏感基因和血清拉曼光譜角度探索新型生物劑量計。目的:（1）探索不同劑量照射后小鼠TRIAP1和AEN基因表達的時間與及劑量效應,研究其作為生物劑量計的潛能。（2）探索表面增強拉曼技術(shù)對不同劑量照射小鼠血清的識別能力,研究其作為輻射生物劑量計的可行性。材料和方法:（1）（a）對BAL B/C雄性小鼠進行1、2、4、8和12Gy的γ射線照射,再對新的一組小鼠注射LPS,獲取小鼠外周血。（b）提取外周血總RNA,反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR檢測TRIAP1和AEN基因的表達。（c）對兩基因進行相對表達分析和劑量效應曲線擬合。（2）（a）對C57BL/6J雄性小鼠進行2、5.5、7和8Gy（或者9Gy）的γ射線照射,獲取小鼠血清。（b）將血清與銀溶膠混合孵育一定時間,用拉曼檢測儀進行檢測獲得... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
摘要
Abstract
引言
第一部分 實時熒光定量PCR檢測輻射敏感基因劑量效應的研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 研究對象
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要器材
            1.1.4 主要儀器
            1.1.5 基因引物和探針
            1.1.6 數(shù)據(jù)處理軟件
        1.2 方法
            1.2.1 試劑溶液的配置
            1.2.2 照射BALB/C小鼠分組表
            1.2.3 尾靜脈血的采集
            1.2.4 小鼠全身外周血的采集
            1.2.5 血清和去血清血的獲取
            1.2.6 LPS腹腔注射方法和用量
            1.2.7 小鼠外周血淋巴細胞的分離
            1.2.8 小鼠外周血全血RNA提取
            1.2.9 淋巴細胞RNA的提取
            1.2.10 血清RNA的提取
            1.2.11 去血清外周血RNA的提取
            1.2.12 反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA的體系和程序
            1.2.13 Real-TimePCR反應體系和程序
    2 結(jié)果
        2.1 實驗樣本的選擇
            2.1.1 外周血、去血清血和淋巴細胞中TRIAP1和AEN基因表達比較
            2.1.2 外周血、去血清血和血清中TRIAP1和AEN基因表達比較
        2.2 cDNA稀釋倍數(shù)的優(yōu)化
        2.3 建立BALB/C小鼠電離輻射模型
        2.4 輻射后兩基因表達的時間效應與劑量效應分析
            2.4.1 TRIAP1基因表達時間-效應和劑量-效應分析
            2.4.2 AEN基因表達時間效應和劑量-效應分析
        2.5 TRIAP1和AEN基因在小鼠注射LPS模擬炎癥反應中的相對表達分析
    3 討論
        3.1 實驗樣本的選擇
        3.2 目的基因的選擇
        3.3 TRIAP1和AEN基因表達的時間效應與劑量效應
        3.4 TRIAP1和AEN基因的輻射敏感特異性
        3.5 實時定量PCR方法檢測TRIAP1和AEN基因作為生物劑量計的展望
    4 結(jié)論
第二部分 表面增強拉曼（SERS）檢測輻射小鼠血清方法建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 研究對象
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要器材
            1.1.4 主要儀器
            1.1.5 數(shù)據(jù)處理軟件
        1.2 方法
            1.2.1 照射C57BL/6J小鼠分組表
            1.2.2 小鼠模型組數(shù)據(jù)采集時間安排
            1.2.3 尾靜脈血的采集
            1.2.4 小鼠全身外周血的采集
            1.2.5 血清的獲取
            1.2.6 SERS檢測操作的流程
            1.2.7 銀溶膠的制備步驟
            1.2.8 銀溶膠的濃縮方式
            1.2.9 血清與納米銀溶膠混合檢測步驟
    2 結(jié)果
        2.1 建立C57BL/6J小鼠電離輻射模型
        2.2 銀溶膠質(zhì)量的檢驗
        2.3 檢測條件的優(yōu)化
            2.3.1 銀溶膠濃縮倍數(shù)的優(yōu)化
            2.3.2 血清與銀溶膠孵育溫度的優(yōu)化
            2.3.3 血清與銀溶膠混合比例的優(yōu)化
            2.3.4 血清與銀溶膠孵育時間的優(yōu)化
        2.4 不同輻射劑量小鼠血清SERS檢測光譜
        2.5 小鼠不同輻射劑量OPLS-DA分類結(jié)果
        2.6 0Gy、7Gy和9Gy劑量組小鼠模型和SERS血清檢測光譜
        2.7 0Gy、7Gy和9Gy不同劑量組OPLS-DA分類結(jié)果
        2.8 SERS峰位拉曼位移對應所屬的分屬物
    3 討論
        3.1 實驗條件的優(yōu)化
        3.2 小鼠輻射損傷模型
        3.3 SERS檢測輻射小鼠血清光譜
        3.4 OPLS-DA統(tǒng)計分析
        3.5 非標記SERS檢測輻射小鼠血清技術(shù)作為快速現(xiàn)場檢測方法的展望
    4 結(jié)論
參考文獻
附錄
在讀期間發(fā)表論文
致謝
綜述 輻射生物劑量計技術(shù)的研究進展
    參考文獻



本文編號：2923244