目的:通過低、中、高不同劑量混合砷以及萊菔硫烷(SFP)和5-雜氮-2′-脫氧胞苷(5-Aza-DC)染毒新西蘭大耳兔,研究Nrf2通路對砷致家兔氧化應激影響。方法:清潔級雌雄新西蘭大耳兔80只,按體質量隨機分為10組,分別為空白對照組、低劑量砷組(0.075mg·kg~(-1)·w~(-1))、中劑量砷組(0.15mg·kg~(-1)·w~(-1))、高劑量砷組(0.75mg·kg~(-1)·w~(-1))、低劑量砷+SFP組、中劑量砷+SFP組、高劑量砷+SFP組、低劑量砷+5-Aza-DC組、中劑量砷+5-Aza-DC組和高劑量砷+5-Aza-DC組。家兔自由飲水,持續(xù)染毒14w,取第9周中期家兔血和第14周末期皮膚進行試驗。1.染砷14周后,取家兔同一背部皮膚樣,電鏡觀察皮膚組織的形態(tài)學改變。2.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測家兔血清中谷胱甘肽(GSH)、血紅素氧化酶(HO-1)、環(huán)氧化酶(COX-2)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)、同型半胱氨酸(HCY)與家兔血清和皮膚中的N-6腺嘌呤特異性DNA甲基轉移酶(N6AMT1)的表達水平。3.用Quantitative Real-time PCR檢測家兔血和皮膚中核因子E2相關因子2(Nrf2)、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1(Keap1)、BTB-CNC異體同源體1(Bach1)、N-6-腺嘌呤DNA甲基轉移酶1(N6AMT1)、亞砷酸甲基轉移酶(As3MT)和多藥耐藥相關蛋白2(MRP2)mRNA表達水平。4.蛋白印跡法(Western blot)檢測各組家兔血和皮膚Nrf2、Keap1、Bach1、As3MT和MRP2蛋白表達水平;結果:1.家兔皮膚電鏡切片結果顯示,砷能造成皮膚角化加重和基細胞層異常,加入SFP輕微改善了皮膚組織損傷,加入5-Aza-DC后角質層增厚。2.ELISA結果:血清中與對照組相比,低、中、高劑量砷組GSH表達明顯降低,且N6AMT1表達升高(P均0.05),中、高劑量砷組HCY、COX-2和HO-1表達升高(P均0.05),高劑量砷組SAM表達升高(P=0.006)。皮膚組織中,與中劑量砷組比,中劑量砷+5-Aza-DC組的N6AMT1表達降低。3.基因水平:1)家兔血中,與對照組比較,低劑量砷組Nrf2、中和高劑量砷組Bach1、高劑量砷組As3MT、N6AMT1、MRP2 mRNA表達水平升高(P均0.05),低劑量砷組Keap1mRNA表達水平降低(P=0.036)。2)家兔皮膚中,與對照組比較,低劑量砷組Nrf2、中劑量砷組Bach1、中和高劑量砷組As3MT和N6AMT1 mRNA表達的水平明顯升高(P均0.05)。與低劑量砷組相比,低劑量砷+5-Aza-DC組Nrf2 mRNA表達降低(P=0.005),Bach1 mRNA表達上升(P=0.017);與高劑量砷組相比,高劑量砷+SFP組的As3MT、N6AMT1和MRP2 mRNA表達水平上升(P均0.05),高劑量砷+5-Aza-DC組的As3MT mRNA表達水平下降(P=0.023)。4.蛋白水平:1)家兔血液中,與對照組比較,低劑量砷組Nrf2、高劑量砷組MRP2蛋白表達上升(P均0.05),低劑量砷組Keap1和Bach1蛋白表達水平降低(P均0.05)。2)家兔皮膚中,與對照組相比,低、中和高劑量砷組Nrf2的蛋白表達上升,Keap1蛋白表達下降(P均0.05),且隨著砷劑量的升高,Nrf2的蛋白表達水平逐漸上升,Keap1的蛋白表達與之相反;中劑量砷組的Bach1的的蛋白表達水平下降(P0.005),低和高劑量砷組MRP2的蛋白表達水平上升(P0.05);與低劑量砷組相比,低劑量砷組+SFP組的Nrf2蛋白表達上升、Keap1和Bach1的蛋白表達下降,低劑量砷組+5-Aza-DC的Nrf2、Keap1和Bach1蛋白表達下降;與中劑量砷組相比,加入5-Aza-DC后As3MT蛋白表達下降,加入SFP后MRP2蛋白表達明顯升高。結論:砷可以激活Nrf2/Keap1信號通路,促進Nrf2下游的相關抗氧化指標和砷代謝指標的表達。萊菔硫烷和5-雜氮-2′-脫氧胞苷可調控Nrf2通路,其中萊菔硫烷作為Nrf2的激活劑,能減輕機體氧化損傷,而5-雜氮-2′-脫氧胞苷主要通過抑制砷甲基化代謝酶的活性,加重機體氧化損傷,但其詳細的作用機制還需進一步研究。
【學位單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R135.1
【部分圖文】：

γP＜0.05圖2 分別為家兔血液GAPDH基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.2 Rabbit blood Gapdh gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak

26圖3 分別為家兔血液Nrf2基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.3 Rabbit blood Nrf2 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak圖4 分別為家兔血液Keap1基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.4 Rabbit blood Keap1 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak圖5 分別為家兔血液Bach1基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.5 Rabbit blood Bach1 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak結果顯示，各組家兔血中As3MT mRNA表達水平總體均數(shù)不全相等（F=3.31，P=0.031）。與空白對照組比較，高劑量砷組As3MT mRNA表達水平上升，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.044）。與低劑量砷組相比，高劑量砷組As3MT mRNA表達水平上升，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.006），與?

圖3 分別為家兔血液Nrf2基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.3 Rabbit blood Nrf2 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak圖4 分別為家兔血液Keap1基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.4 Rabbit blood Keap1 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak圖5 分別為家兔血液Bach1基因擴增曲線、溶解曲線和溶解峰Fig.5 Rabbit blood Bach1 gene amplification curve, dissolution curve and dissolved peak結果顯示，各組家兔血中As3MT mRNA表達水平總體均數(shù)不全相等（F=3.31，P=0.031）。與空白對照組比較，高劑量砷組As3MT mRNA表達水平上升，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.044）。與低劑量砷組相比，高劑量砷組As3MT mRNA表達水平上升，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.006），與中劑量

【參考文獻】

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本文編號：2811339