本文關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及突觸發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：亞硝酸鹽,一類(lèi)亞硝酸無(wú)機(jī)化合物的總稱(chēng),以亞硝酸鈉為主。機(jī)體內(nèi)硝酸鹽在口腔和胃內(nèi)細(xì)菌作用下也轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。亞硝酸鈉為白色顆�；蚍勰�,易溶于水,并在造紙業(yè)、建筑業(yè)中廣泛使用,食品中也允許作為添加劑限量使用。人體攝入0.3~0.5g的亞硝酸鹽就可引起中毒甚至死亡,機(jī)體長(zhǎng)期攝入亞硝酸鹽主要會(huì)引起高鐵血紅蛋白血癥、上消化道腫瘤、先天畸形等結(jié)局,而亞硝酸鹽暴露對(duì)中樞神經(jīng)系的研究較少,尤其是對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響更是少見(jiàn)。還有資料表明,硝酸鹽和亞硝酸鹽在機(jī)體內(nèi)的重要代謝產(chǎn)物---亞硝酰胺中甲基及乙基亞硝基脲可以使大鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物子代產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的畸形,我們推測(cè)孕期亞硝酸鹽暴露也可能對(duì)子鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中突觸的發(fā)育產(chǎn)生損害,所以本研究分兩部分從突觸出發(fā)觀察亞硝酸鹽暴露下學(xué)習(xí)記憶的改變情況。其中第一部分:對(duì)成年小鼠進(jìn)行亞硝酸鹽暴露后檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶的改變并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討;第二部分:對(duì)孕期小鼠進(jìn)行亞硝酸鹽暴露觀察子鼠視皮質(zhì)區(qū)突觸的發(fā)育情況并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行分析。通過(guò)兩部分研究更加系統(tǒng)地分析亞硝酸鹽暴露對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的改變情況,加強(qiáng)研究的真實(shí)可信性。目的:探討亞硝酸鹽暴露下小鼠學(xué)習(xí)記憶的改變及孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)子代突觸發(fā)育的影響。方法:本研究第一部分應(yīng)用6g·L-1亞硝酸鹽溶液對(duì)63只4~6周齡健康雄性C57BL/6J小鼠持續(xù)灌胃3個(gè)月,以建立亞硝酸鹽暴露模型(低劑量組暴露劑量為60mg·kg-1,高劑量組暴露劑量為120mg·kg-1,對(duì)照組采用生理鹽水灌胃)觀察亞硝酸鹽暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變情況,并對(duì)其改變機(jī)制進(jìn)行初步探討;第二部分則選取7~10周齡成年健康C57BL/6J小鼠,雌鼠63只(未生育),雄鼠22只,雌雄小鼠1∶1合籠交配(16:00),次日8∶00檢查陰道栓塞情況。如發(fā)現(xiàn)雌鼠陰道存在栓子則將該鼠視為已受孕并將該日定為妊娠第1天(embryonic day 0,E0)。確定妊娠當(dāng)日分離出雄鼠,妊娠雌鼠單籠照常飼養(yǎng)。從E0開(kāi)始對(duì)妊娠雌鼠進(jìn)行亞硝酸鹽暴露處理(低劑量組暴露劑量為60 mg·kg-1,高劑量組暴露劑量為120mg·kg-1,對(duì)照組采用生理鹽水灌胃)直至生產(chǎn),完成孕期亞硝酸鹽暴露模型的建立。模型建立后,分別用Morris水迷宮檢測(cè)行為學(xué)的改變,利用免疫熒光染色觀察突觸素(Synaptophysin)和突觸核蛋白(γ-Synuclein)的改變,并用western blot技術(shù)對(duì)Synaptophysin進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。結(jié)果:第一部分水迷宮實(shí)驗(yàn)中前2天的獲得性實(shí)驗(yàn)中各組小鼠逃逸潛伏期比較長(zhǎng)且沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。第3天開(kāi)始亞硝酸鹽暴露組小鼠逃逸潛伏期延長(zhǎng)且與亞硝酸鹽有劑量依賴(lài)關(guān)系(P0.05)。對(duì)比小鼠第7天運(yùn)動(dòng)軌跡發(fā)現(xiàn),對(duì)照組小鼠找到平臺(tái)的路程最短,而高劑量組小鼠探尋平臺(tái)路程軌跡明顯延長(zhǎng)且復(fù)雜化。在第8天的探查性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),模型組小鼠與對(duì)照組相比,模型組小鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間和穿越平臺(tái)次數(shù)均減少且與亞硝酸鹽暴露劑量存在依賴(lài)關(guān)系(P0.05)。各組小鼠視皮質(zhì)突觸數(shù)密度(個(gè)/μm2)進(jìn)行測(cè)量時(shí)經(jīng)統(tǒng)計(jì)得出,對(duì)照組突觸數(shù)為4.74±0.56/μm2,低劑量組3.20±0.18/μm2,高劑量組1.89±0.28/μm2,突觸核蛋白的改變情況為:對(duì)照組γ-Synuclein數(shù)為1983±65.89/mm2,低劑量組2394±77.39/mm2,高劑量組3733±175.18/mm2,因此模型組中突觸數(shù)量均明顯減少而γ突觸核蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多且與亞硝酸鹽暴露有劑量依賴(lài)關(guān)系(P0.05),western blot檢測(cè)結(jié)果與免疫熒光結(jié)果一致。第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第一部分結(jié)果相似,在免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)中,模型組子鼠視皮質(zhì)突觸數(shù)量減少而γ突觸核蛋白表達(dá)增加且與暴露劑量有依賴(lài)關(guān)系(P0.05),利用水迷宮對(duì)各組子鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),從實(shí)驗(yàn)第3天起亞硝酸鹽暴露組的逃逸潛伏期則高于對(duì)照組(P0.05),低劑量組和高劑量組之間則沒(méi)有明顯差異(P0.05);在第8天探查性實(shí)驗(yàn)中,各組目標(biāo)象限停留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),提示孕期亞硝酸鹽暴露會(huì)降低子鼠的學(xué)習(xí)能力,而對(duì)空間記憶能力的影響不明顯。結(jié)論:成年小鼠亞硝酸鹽暴露會(huì)降低小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,其機(jī)制是γ突觸核蛋白的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致突觸數(shù)量的減少;孕期亞硝酸鹽暴露會(huì)降低子鼠的學(xué)習(xí)能力,而對(duì)空間記憶能力的影響不明顯,同時(shí)孕期亞硝酸鹽暴露會(huì)影響子代視皮質(zhì)突觸的發(fā)育,減少突觸數(shù)量,對(duì)其影響具有長(zhǎng)時(shí)程效應(yīng)和劑量相關(guān)性,而γ突觸核蛋白的過(guò)度表達(dá)可能是突觸丟失的主要原因。
【關(guān)鍵詞】：亞硝酸鹽暴露 學(xué)習(xí)記憶 突觸 γ突觸核蛋白
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分：亞硝酸鹽暴露對(duì)成年小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響10-34
• 1 前言10-12
• 2 儀器、試劑、材料和方法12-20
• 2.1 主要儀器12
• 2.2 主要試劑12-13
• 2.3 主要試劑的配制13-16
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組16
• 2.4.2 行為學(xué)檢測(cè)16-17
• 2.4.3 免疫熒光檢測(cè)17-18
• 2.4.4Western Blot檢測(cè)18
• 2.4.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18-20
• 3 結(jié)果20-28
• 3.1 亞硝酸鹽暴露對(duì)小鼠行為學(xué)的影響20-22
• 3.2 亞硝酸鹽暴露后突觸素和 γ 突觸核蛋白的表達(dá)22-28
• 4 討論28-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 第二部分：孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)子鼠視皮質(zhì)突觸發(fā)育的影響34-54
• 1 前言34-36
• 2 材料與方法36-40
• 2.1 動(dòng)物模型與分組36
• 2.2 免疫熒光檢測(cè)36-37
• 2.3 Western blot檢測(cè)37
• 2.4 行為學(xué)檢測(cè)37-38
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38-40
• 3 結(jié)果40-48
• 3.1 孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)子鼠的影響40
• 3.2 孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)子鼠視皮質(zhì)突觸素和突觸核蛋白的影響40-44
• 3.3Western Blot檢測(cè)Synaptophysin的表達(dá)44-45
• 3.4 水迷宮檢測(cè)孕期亞硝酸鹽暴露后子鼠行為學(xué)的改變45-48
• 4 討論48-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 文獻(xiàn)綜述54-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-64
• 攻讀學(xué)位期間科研情況64-65

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  本文關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及突觸發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：280630