發(fā)布時(shí)間：2020-08-26 19:42

【摘要】：目的本研究以鄰苯二甲酸二乙基已基酯(Di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)和鎘為受試物,研究DEHP和鎘聯(lián)合染毒對(duì)青春期雄性大鼠生殖功能的影響。方法1、采用3×3析因設(shè)計(jì),將54只健康6周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為9組,分別為溶劑對(duì)照(玉米油+蒸餾水)組,250mg/kg DEHP、1 000mg/kg DEHP、1mg/kg氯化鎘、3mg/kg氯化鎘、250mg/kg DEHP+1mg/kg氯化鎘、250mg/kg DEHP+3mg/kg氯化鎘、1 000mg/kg DEHP+1mg/kg氯化鎘、1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化鎘染毒組,每組6只。采用灌胃方式進(jìn)行染毒,每天1次,連續(xù)染毒4周,染毒容量為10ml/kg。2、末次染毒24h后,稱重并摘除眼球收集血樣,離心分離血清,采用ELISA法測(cè)定血清睪酮含量;大鼠處死后收集標(biāo)本,采用CASA精子分析系統(tǒng)記錄精子活力及密度;采用HE染色法分析睪丸組織細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)改變;TUNEL法檢測(cè)睪丸細(xì)胞凋亡情況;采用紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)睪丸組織中MDA含量和T-SOD、GSH-Px活力的變化;提取睪丸組織總RNA,采用Real-Time PCR檢測(cè)Akt、bcl-2、caspase-3、caspase-9的mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1、體重變化和臟器系數(shù)250mg/kg DEHP+1mg/kg氯化鎘和1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化鎘染毒組大鼠的體重增量比對(duì)照組小(P0.05);聯(lián)合染毒可導(dǎo)致大鼠肝臟系數(shù)增大(肝腫大),但DEHP和鎘染毒對(duì)睪丸系數(shù)的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、精子活力及密度與對(duì)照組比較,1 000mg/kg DEHP+1mg/kg氯化鎘和1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化鎘染毒組大鼠的精子密度和精子活力均較低(P0.05);析因分析結(jié)果顯示DEHP和鎘聯(lián)合染毒對(duì)大鼠精子活力及密度無交互作用(P0.05)。3、睪丸組織病理形態(tài)DEHP和鎘染毒可導(dǎo)致睪丸精曲小管萎縮,外壁邊緣欠光滑,生精細(xì)胞層數(shù)減少且排列紊亂,部分組織溶解缺失形成空洞,管腔內(nèi)成熟精子明顯減少。4、睪丸組織細(xì)胞凋亡DEHP和鎘單獨(dú)及聯(lián)合染毒均可以使睪丸細(xì)胞異常凋亡,且發(fā)生凋亡的細(xì)胞主要為精原細(xì)胞和精母細(xì)胞。析因分析結(jié)果顯示聯(lián)合染毒對(duì)大鼠睪丸細(xì)胞凋亡率影響的交互作用表現(xiàn)為拮抗作用(P0.05)。5、血清睪酮含量與對(duì)照組相比較,各個(gè)染毒組大鼠血清睪酮含量均較低(P0.05)。析因分析結(jié)果顯示聯(lián)合染毒對(duì)大鼠血清睪酮含量的影響無交互作用(P0.05)。6、睪丸組織氧化應(yīng)激DEHP和鎘單獨(dú)及聯(lián)合染毒可以導(dǎo)致睪丸組織T-SOD、GSH-Px活力降低和MDA含量升高(P0.05)。聯(lián)合染毒對(duì)大鼠睪丸T-SOD活力影響的交互作用表現(xiàn)為拮抗作用(P0.05),對(duì)GSH-Px活力和MDA含量的影響無交互作用(P0.05)。7、睪丸組織Akt、bcl-2、caspase-3、caspase-9的mRNA相對(duì)表達(dá)水平與對(duì)照組相比較,染毒組bcl-2、caspase-3、caspase-9 mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異(P0.05),而3mg/kg鎘染毒組和聯(lián)合染毒組大鼠的睪丸組織中Akt mRNA表達(dá)水平均升高(P0.05)。聯(lián)合染毒對(duì)caspase-9 mRNA表達(dá)水平影響表現(xiàn)為拮抗作用(P0.05),對(duì)Akt、bcl-2、caspase-3表達(dá)水平的影響無交互作用(P0.05)。結(jié)論1、DEHP和鎘青春期染毒可導(dǎo)致雄性大鼠的體重下降、肝臟腫大,睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)受到破壞,支持細(xì)胞和生精細(xì)胞減少,精子活力和密度下降,從而影響正常的雄性生殖功能。2、DEHP和鎘生殖毒性作用的可能機(jī)制有內(nèi)分泌功能紊亂和睪丸氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的生精細(xì)胞凋亡。3、DEHP和鎘聯(lián)合染毒對(duì)睪丸組織T-SOD活性、細(xì)胞凋亡率和caspase-9 mRNA表達(dá)水平的影響表現(xiàn)為拮抗作用。
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114
【圖文】：

武漢科技大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠精子密度及活力的析因分析見表 3.5。DEHP 和鎘染毒對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠及活動(dòng)精子密度的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DEHP 染毒對(duì)大鼠的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DEHP 和鎘聯(lián)合染毒對(duì)大鼠精子密度力及活動(dòng)精子密度影響的交互作用均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

武漢科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3.4 聯(lián)合染毒致睪丸組織病理學(xué)改變?nèi)鐖D 3.2 所示，對(duì)照組的 HE 染色切片中睪丸組織結(jié)構(gòu)正常，多層處于不同發(fā)育階段的生精細(xì)胞(精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和精子細(xì)胞)構(gòu)成，細(xì)胞層次清晰且排列緊密，管腔內(nèi)可見成熟精子(圖 3.2 對(duì)照)。與對(duì)照組相比，低劑量 DEHP 和低劑量鎘單獨(dú)染毒組睪丸組織的大部分精曲小管形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有異常，僅有少量出現(xiàn)生精細(xì)胞排列紊亂等異常（圖 3.2 a、b）。高劑量 DEHP 和高劑量鎘單獨(dú)染毒組以及聯(lián)合染毒組與對(duì)照組相比，睪丸精曲小管的結(jié)構(gòu)異常較明顯，表現(xiàn)為精曲小管萎縮，外壁邊緣欠光滑，生精細(xì)胞層數(shù)減少且排列紊亂，部分組織溶解缺失形成空洞，管腔內(nèi)成熟精子明顯減少（圖 3.2A、B、ab、aB、Ab、AB）。

圖 3.3 大鼠睪丸組織細(xì)胞凋亡情況（TUNEL，200×）圖 3.4 聯(lián)合染毒對(duì)大鼠睪丸細(xì)胞凋亡率的影響注：*與對(duì)照組相比較，P<0.05；每組 3 只大鼠表 3.6 聯(lián)合染毒大鼠睪丸細(xì)胞凋亡率影響的析因分析F P

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本文編號(hào)：2805607