【摘要】：目的:探討氚水染毒后,染毒組與對(duì)照組相比差異基因的表達(dá)情況。觀察細(xì)胞形態(tài)、大小、增殖和衰老改變,并估算出氚水所致細(xì)胞吸收劑量,為氚水內(nèi)照射對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可能造成的損傷提供理論依據(jù)。方法:1.用3.7?103 Bq/ml氚水處理HUVEC細(xì)胞48h后,收集染毒組與對(duì)照組RNA,采用基因芯片技術(shù)分析染毒組與對(duì)照組間差異表達(dá)的基因。運(yùn)用GO和Pathway分析對(duì)差異基因功能以及可能參與的信號(hào)通路進(jìn)行限定和描述。通過(guò)String 10.5在線分析工具對(duì)差異基因相互作用關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè),篩選出中心節(jié)點(diǎn)基因。2.HUVEC細(xì)胞用3.7?103 Bq/ml氚水連續(xù)染毒15代,分別收集未染毒細(xì)胞、染毒的第3、6、9、12、15代細(xì)胞,記作T0、T3、T6、T9、T12、T15。3.在普通光學(xué)顯微鏡下觀察氚水染毒后,細(xì)胞生長(zhǎng)24h、48h、72h的形態(tài)并拍照記錄,使用Image J軟件對(duì)細(xì)胞表面積大小進(jìn)行測(cè)量。4.采用CCK-8細(xì)胞增殖與毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氚水染毒后HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)24h、48h、72h增殖活性的改變情況。5.采用β-半乳糖苷酶染色試劑盒,檢測(cè)氚水染毒后HUVEC細(xì)胞衰老的情況。6.采用COOLER算法,通過(guò)代碼PARTRAC估算徑向距離,對(duì)液態(tài)水電子徑跡進(jìn)行蒙特卡洛模擬,估算氚水所致細(xì)胞吸收劑量大小。結(jié)果:1.氚水染毒后,CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1基因表達(dá)顯著上調(diào),RPS27A、KISS1基因表達(dá)顯著下調(diào)。2.氚水染毒后,隨染毒時(shí)間增加,HUVEC細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,胞漿顆粒物增加,邊界模糊,細(xì)胞表面積有所增加,T3、T6代細(xì)胞中觀察到細(xì)胞衰老現(xiàn)象;T6、T9、T12、T15代細(xì)胞的增殖活性受到抑制。隨染毒時(shí)間增加,氚水所致細(xì)胞吸收劑量增加。結(jié)論:1.CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1、RPS27A、KISS1基因可能參與氚水對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)照射損傷過(guò)程。2.氚水對(duì)HUVEC細(xì)胞具有細(xì)胞毒性,隨著染毒代數(shù)增加,對(duì)細(xì)胞的增殖活性抑制越明顯。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R14
【圖文】：

.03、1.99、1.96，所有值均介于 1.8-2.1 之間，說(shuō)明對(duì)照組與實(shí)；（2）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組標(biāo)準(zhǔn)變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如圖 1.照組樣品電泳條帶清晰，28S:18S rRNA 條帶亮度大于或接近 良好無(wú)降解。以上結(jié)果均說(shuō)明提取的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 RNA 樣片實(shí)驗(yàn)要求。表 1.1 RNA 樣品純度與濃度測(cè)定分析結(jié)果Sample ID OD260/280 OD260/230 濃度（ng/μl）1 2.03 2.11 1125.422 2.05 1.98 790.023 2.06 1.82 602.924 2.03 1.93 1522.745 1.99 2.23 794.356 1.96 2.24 776.84

14圖 1.2 基因芯片掃描結(jié)果圖1.3 氚水染毒實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間差異表達(dá)的 LncRNA（火山圖）圖 1.4 氚水染毒實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間差異表達(dá)的 mRNA（火山圖）的數(shù)據(jù)點(diǎn)代表實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比顯著上調(diào)的基因。LncRNA 分析結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，有 1717 個(gè)基因顯著上調(diào)，3994 個(gè)基因顯著下調(diào)（fold change > 2，P < 0.05）。mRNA 分析結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，有 4562 個(gè)基因顯著上調(diào)，1433 個(gè)基因顯著下調(diào)（fold change > 2，P < 0.05）。圖 1.5、圖 1.6 分別是 LncRNA與 mRNA 聚類分析熱圖結(jié)果。后續(xù)實(shí)驗(yàn)中將對(duì)差異 mRNAs 進(jìn)行詳細(xì)分析?

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本文編號(hào)：2733932