本文關(guān)鍵詞：制備工藝對(duì)滸苔多糖初級(jí)結(jié)構(gòu)和降血糖作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究不同制備工藝對(duì)滸苔多糖(Enteromorpha’s polysaccharide,EP)初級(jí)結(jié)構(gòu)的影響;研究滸苔多糖分離純化的條件;研究不同制備工藝所得滸苔多糖降血糖的作用;研究滸苔多糖初級(jí)結(jié)構(gòu)與其降血糖作用的關(guān)系。方法:1、以福建沿海所產(chǎn)滸苔為實(shí)驗(yàn)材料,分別采用超聲波輔助制備法或纖維素酶法制備滸苔多糖,兩者多糖提取液,均通過(guò)離心去渣,通過(guò)中性蛋白酶去除蛋白質(zhì),通過(guò)透析袋去除鹽類(lèi)物質(zhì),通過(guò)DA201樹(shù)脂去除色素后,采用醇沉法結(jié)合凍干工藝得到超聲波法制備的滸苔粗多糖UEP(EP by ultrasonic)和纖維素酶法制備的滸苔粗多糖EEP(EP by enyzme)。2、采用DEAE-52纖維素和Sephadex-100凝膠分離純化滸苔粗多糖,得到UEP的主成分UEP1和EEP的主成分EEP1。對(duì)UEP1和EEP1進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,用液相色譜分析分子量,用氣相色譜分析單糖組成,用紅外線光譜分析功能團(tuán);用苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量,用硫酸鋇比濁法測(cè)定硫酸根含量,用間羥基聯(lián)苯法測(cè)定糖醛酸含量。3、以Hep G2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用胰島素和二甲雙胍作為陽(yáng)性對(duì)照組,觀察UEP1和EEP1是否能降低葡萄糖。4、建立胰島素抵抗模型,采用二甲雙胍作為陽(yáng)性對(duì)照組,觀察UEP1和EEP1是否能降低培養(yǎng)基內(nèi)葡萄糖含量,并通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)測(cè)定肝細(xì)胞核因子(HNFs)家族、胰島素受體(IR)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(GLUTs)家族mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1、滸苔多糖的制備及分離純化uep和eep均為淡綠色粉末狀固體,不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。水溶性較差,在水中的最大溶解度為40mg/ml。uep、eep經(jīng)分離純化,均得到五個(gè)組分,且都以第一個(gè)組分為主成分。uep五個(gè)組分摩爾比為146:27:40:3:1,主成分uep1占uep的67.28%,回收率為98.85%;eep五個(gè)組分摩爾比為89:18.5:27:8.5:1,主成分eep1占eep的61.80%�；厥章蕿�99.12%。uep1和eep1均為白色粉末狀固體,不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。uep1、eep1較uep、eep水溶性降低,在水中的最大溶解度為20mg/ml。滸苔多糖水溶液可形成凝膠,且這種溶液——凝膠的轉(zhuǎn)變現(xiàn)象是熱可逆的。2、滸苔多糖結(jié)構(gòu)和成分分析uep1和eep1均是α-吡喃型多糖,富含硫酸基團(tuán),不含蛋白質(zhì),且含有糖醛酸、羧酸、醚鍵;含有鼠李糖(rha)、木糖(xyl)、甘露糖(man)、葡萄糖(glu)、半乳糖(gal),以rha含量最高。但uep1和eep1的初級(jí)結(jié)構(gòu)不完全相同。uep1中rha、xyl、man、glu、gal的摩爾比為3.96:1.09:0.24:0.34:0.16;eep1中rha、xyl、man、glu、gal的摩爾比為3.08:1:0.17:0.30:0.11。uep1平均分子量為179547,eep1平均分子量為520160。uep1多糖含量為98.59%,eep1為97.09%。uep1硫酸根含量為17.74%,eep1為20.71%。uep1糖醛酸含量為22.20%,eep1為21.76%。3、不同制備工藝的滸苔多糖降血糖效果及機(jī)制研究hepg2細(xì)胞葡萄糖消耗試驗(yàn)結(jié)果,與空白組(blank)比較,陽(yáng)性對(duì)照組1(即胰島素組,insulin)、陽(yáng)性對(duì)照組2(二甲雙胍組,metformin)、uep1由高到低四個(gè)劑量組(huep1、muep1、luep1、suep1)、eep1由高到低四個(gè)劑量組(heep1、meep1、leep1、seep1)均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin比較,blank、luep1、suep1、seep1的葡萄糖消耗量(gc)較低(p0.05),insulin、heep1、meep1的gc較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組insulin組比較,blank、metformin、muep1、luep1、suep1、seep1的gc較低(p0.05),meep1的gc較高(p0.05)。比較uep1降血糖最佳濃度huep1與eep1降血糖最佳濃度meep1,發(fā)現(xiàn)meep1降血糖效果優(yōu)于huep1,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。實(shí)驗(yàn)建立了胰島素抵抗模型,以1×10-3mmol/l胰島素作用36小時(shí)后開(kāi)始產(chǎn)生胰島素抵抗,60小時(shí)內(nèi)模型穩(wěn)定。油紅o染色可見(jiàn)胰島素抵抗模型鮮紅色脂滴明顯增多。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與空白對(duì)照組blank比較,模型組(model)、uep1各劑量組、eep1各劑量組的gc較低(p0.05);與模型組model比較,其它組gc均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin比較,model、huep1、muep1、luep1、suep1、leep1、seep1的gc較低(p0.05)。比較uep1降血糖最佳濃度huep1與eep1降血糖最佳濃度heep1,發(fā)現(xiàn)heep1降血糖效果優(yōu)于huep1,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。觀察uep1和eep1各基因的表達(dá)量:①hnf4α:與blank比較,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,muep1、luep1、suep1、meep1、leep1、seep1表達(dá)量較低。②hnf1α:與blank對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,metformin、huep1、muep1、heep1、meep1、leep1表達(dá)量較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,muep1、luep1、suep1、leep1、seep1表達(dá)量較低(p0.05)。③hnf1β:與blank對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,metformin、huep1、muep1、luep1、heep1、meep1、leep1、seep1表達(dá)量較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,muep1、luep1、suep1、meep1、leep1、seep1表達(dá)量較高(p0.05)。④hnf6:與blank對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,luep1、suep1、meep1、leep1、seep1表達(dá)量較低(p0.05)。⑤ir:與blank對(duì)比,在各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,heep1表達(dá)量較高,luep1、suep1、leep1、seep1表達(dá)量較低(p0.05)。⑥glut4:與blank對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較低(p0.05);與模型組model對(duì)比,實(shí)驗(yàn)劑量組均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,huep1、muep1、heep1表達(dá)量較高(p0.05)。⑦glut2:與blank對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組中均較高(p0.05);與模型組model對(duì)比,各實(shí)驗(yàn)劑量組均較高(p0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組metformin對(duì)比,ep各劑量組表達(dá)量均較低(p0.05)。比較uep1和eep1各基因表達(dá)量:對(duì)比hnf6中uep1最佳濃度huep1與eep1最佳濃度heep1,huep1優(yōu)于heep1(p0.05),對(duì)比ir中uep1最佳濃度heep1與eep1最佳濃度huep1,heep1優(yōu)于huep1(p0.05)。其余hnf4α、hnf1α、hnf1β、glut4、glut2中uep1最佳濃度與eep1最佳濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1、兩種不同制備工藝對(duì)滸苔多糖的初級(jí)結(jié)構(gòu)及其降血糖作用均有一定的影響,但其主體結(jié)構(gòu)和主要功能無(wú)變化。2、uep和eep分離純化后均可分為五個(gè)組分,以第一組分為主。uep1和eep1均是α-吡喃型多糖,富含硫酸基團(tuán),是由不同大小多糖分子組成的混合體。兩者均以rha為主,還有xyl、man、glu、gal。但其結(jié)構(gòu)并不完全相同,uep1平均分子量小于eep1;uep1含有rib、fuc,而eep1沒(méi)有,且單糖摩爾構(gòu)成比不同;uep1多糖含量高于eep1;硫酸根含量低于eep1;糖醛酸含量高于eep1。3、采用胰島素1×10-3mmol/l作用于hepg2細(xì)胞36h建立胰島素抵抗模型,經(jīng)油紅o染色鑒定,模型細(xì)胞鮮紅色脂滴增多,正常細(xì)胞僅見(jiàn)少量脂滴。rt-pcr結(jié)果顯示hnfs、ir、glut4表達(dá)量下調(diào),glut2表達(dá)量上調(diào),模型在60h內(nèi)穩(wěn)定,可用于研究藥物對(duì)2型糖尿病的作用。4、UEP1和EEP1均具有降血糖的功效,且作用效果可能優(yōu)于胰島素、二甲雙胍。在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi),EEP1降血糖的作用優(yōu)于UEP1,這可能與EEP1的分子量大于UEP1有關(guān),可能與其能夠更多的上調(diào)胰島素受體的數(shù)目有關(guān)。5、EP改善胰島素抵抗模型可能的機(jī)制有:①通過(guò)上調(diào)肝細(xì)胞核因子HNFs的表達(dá)量;②通過(guò)上調(diào)IR的表達(dá)量;③通過(guò)上調(diào)GLUT4的表達(dá)量;④通過(guò)下調(diào)GLUT2的表達(dá)量。
【關(guān)鍵詞】：滸苔多糖 制備工藝 初級(jí)結(jié)構(gòu) 降血糖 構(gòu)效關(guān)系
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R151
【目錄】：

• 中英文對(duì)照表6-7
• 摘要7-12
• Abstract12-17
• 前言17-20
• 第一部分 滸苔多糖的制備、分離純化及初級(jí)結(jié)構(gòu)分析20-45
• 1 材料和方法20-29
• 1.1 儀器20-21
• 1.2 材料和試劑21
• 1.3 滸苔多糖制備方法21-22
• 1.4 滸苔多糖的初步提純22-23
• 1.5 滸苔多糖的分離純化23-24
• 1.6 紫外分析24
• 1.7 葡聚糖凝膠柱層析24-25
• 1.8 液相色譜測(cè)分子量25
• 1.9 氣相色譜測(cè)定單糖的組成25-26
• 1.10 紅外光譜檢測(cè)官能團(tuán)26
• 1.11 苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量26-27
• 1.12 硫酸鋇比濁法測(cè)定硫酸根含量27-28
• 1.13 間羥基聯(lián)苯法測(cè)定糖醛酸含量28-29
• 2 結(jié)果29-39
• 2.1 滸苔多糖溶液脫色29-30
• 2.2 滸苔多糖的分離純化30
• 2.3 滸苔多糖的基本性質(zhì)30-31
• 2.4 紫外分析31
• 2.5 葡聚糖凝膠柱層析31
• 2.6 滸苔多糖的分子量31-33
• 2.7 滸苔多糖的單糖組成33-36
• 2.8 滸苔多糖的官能團(tuán)36-38
• 2.9 滸苔多糖的多糖含量38
• 2.10 滸苔多糖的硫酸根含量38-39
• 2.11 滸苔多糖的糖醛酸含量39
• 3 討論39-43
• 3.1 滸苔多糖的提取方法39-40
• 3.2 滸苔多糖的分離純化40-41
• 3.3 滸苔多糖分子量的分布41-42
• 3.4 滸苔多糖的單糖組成42-43
• 3.5 滸苔多糖的功能團(tuán)分析43
• 4 結(jié)論43-45
• 第二部分 不同制備工藝滸苔多糖降血糖效果及機(jī)制研究45-71
• 1 材料與方法45-52
• 1.1 儀器45
• 1.2 材料和試劑45-46
• 1.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象46
• 1.4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備46
• 1.5 葡萄糖消耗試驗(yàn)46-47
• 1.6 改善細(xì)胞胰島素抵抗試驗(yàn)47-48
• 1.7 滸苔多糖對(duì)Hep G2細(xì)胞mRNA表達(dá)的影響48-52
• 1.8 統(tǒng)計(jì)分析52
• 2 結(jié)果52-65
• 2.1 葡萄糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線52
• 2.2 葡萄糖消耗試驗(yàn)52-54
• 2.3 胰島素抵抗模型的建立54-56
• 2.4 改善胰島素抵抗模型試驗(yàn)56-58
• 2.5 滸苔多糖對(duì)Hep G2細(xì)胞mRNA表達(dá)的影響58-65
• 3 討論65-69
• 3.1 滸苔多糖具有降血糖作用65-67
• 3.2 滸苔多糖對(duì)HNFs基因的影響67-68
• 3.3 滸苔多糖對(duì)IR的影響68
• 3.4 滸苔多糖對(duì)GLUTs的影響68-69
• 4 結(jié)論69-71
• 參考文獻(xiàn)71-79
• 綜述79-86
• 參考文獻(xiàn)83-86
• 致謝86-87
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文87

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林文庭;廖冬冬;陳達(dá)妙;;滸苔多糖功能飲料對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響及其機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年01期

  本文關(guān)鍵詞：制備工藝對(duì)滸苔多糖初級(jí)結(jié)構(gòu)和降血糖作用的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：271437