發(fā)布時間：2020-04-19 08:25

【摘要】：研究背景三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)是工業(yè)上常用的有機溶劑之一,通常作為金屬部件和電子元件脫脂劑和去污清洗劑而被廣泛應用于電鍍、五金、電子等行業(yè)。長期暴露于TCE的工人可能會引起職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT),該病主要癥狀為嚴重皮疹、發(fā)熱、肝損害和淺淋巴結腫大,其中嚴重的肝損傷是患者死亡的主要原因之一。前期研究表明補體激活參與了三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝損傷,肝臟組織存在MAC沉積,且肝細胞未見明顯裂解死亡,由此可知MAC可能發(fā)揮亞裂解作用介導肝臟損傷。亞裂解水平的MAC能夠激活細胞內的一系列信號通路,加重炎癥反應。MAC能夠引起平滑肌細胞、內皮細胞、視網(wǎng)膜色素上皮細胞等多種細胞的NF-κB信號通路的活化。TCE致敏小鼠肝臟組織中沉積的MAC是否通過誘導NF-κB信號通路的活化介導免疫性肝臟損傷有待研究。研究目的通過建立三氯乙烯致敏小鼠模型,采用腹腔注射重組蛋白sCD59-Cys抑制MAC的沉積,檢測補體調節(jié)蛋白CD59a的表達水平、MAC沉積水平、NF-κB信號通路活化及肝臟損傷的情況,探討MAC在三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝損傷中的作用及可能機制。研究方法6-8周無特定病原體級雌性BALB/c小鼠(n=89),適應性飼養(yǎng)后隨機分為空白對照組(n=5),溶劑對照組(n=5),sCD59-Cys對照組(n=5),TCE處理組(n=50),TCE+sCD59-Cys處理組(n=24)。建立TCE致敏BALB/c小鼠實驗模型,末次激發(fā)后24 h根據(jù)皮膚致敏反應評分將小鼠分為致敏組和未致敏組,分別于末次激發(fā)后24 h、72 h和7 d處死小鼠。收集血清和肝臟組織。采用HE染色觀察小鼠肝臟病理改變,生化試劑盒檢測肝功能指標谷丙轉氨酶(alanine amiotransferase,ALT)和谷草轉氨酶(aspartate transaminase,AST),實時定量RT-PCR檢測TNF-α和IL-1βmRNA水平,免疫印跡法檢測肝臟CD59a、P-IκBα和核NF-κB p65蛋白表達水平,免疫組織化學法檢測肝臟CD59a分布情況和MAC沉積水平。結果1.致敏情況空白對照、溶劑對照組以及sCD59-Cys對照組小鼠背部皮膚均未出現(xiàn)紅斑、水腫。TCE處理組致敏率為19/50(38.0%),TCE+sCD59-Cys處理組致敏率為10/24(41.7%)。2.TCE致敏小鼠肝臟損傷組織病理學檢測結果顯示,空白對照和溶劑對照組小鼠肝臟組織未出現(xiàn)病理學改變;TCE致敏24 h組和72 h組肝臟發(fā)生病變,72 h組更為嚴重,肝細胞發(fā)生氣球樣變性,TCE致敏7 d組肝臟組織恢復正常。肝功能檢測結果顯示,與空白對照組小鼠相比,溶劑對照組小鼠血清ALT、AST水平無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏24 h、72 h組ALT、AST水平升高,其中72 h時達到峰值(P0.05),7 d時恢復(P0.05)。3.TCE致敏小鼠肝臟TNF-α和IL-1βmRNA水平升高實時定量RT-PCR結果顯示,與空白對照組相比,溶劑對照組小鼠肝臟組織TNF-α和IL-1βmRNA轉錄水平均無明顯差異(P0.05),TCE致敏24 h、72 h組TNF-α和IL-1βmRNA轉錄水平明顯升高(P0.05),均在72 h達到峰值(P0.05),7 d時恢復(P0.05)。4.TCE致敏小鼠肝臟CD59a表達水平降低免疫組織化學法檢測顯示,空白對照組和溶劑對照組小鼠肝臟組織細胞表面CD59a廣泛表達,呈條索狀分布,TCE致敏小鼠肝臟組織細胞表面CD59a表達降低,在72 h時表達最低,7 d時恢復。免疫印跡結果顯示,與空白對照組相比,溶劑對照組CD59a蛋白表達水平無明顯變化(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏24 h、72 h組CD59a蛋白表達水平明顯降低(P0.05),在72 h時降到最低,7 d時恢復(P0.05)。5.TCE致敏小鼠肝臟MAC沉積水平升高免疫組織化學法檢測顯示,空白對照和溶劑對照組小鼠肝臟組織無MAC沉積;與溶劑對照組相比,TCE致敏24 h、72 h組肝臟組織有明顯可見MAC沉積,且在72 h最為明顯,組化評分差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏7 d組肝臟組織MAC沉積水平無明顯差異(P0.05)。6.sCD59-Cys減輕TCE致敏小鼠肝臟損傷組織病理學檢測結果顯示,溶劑對照組和sCD59-Cys對照組小鼠肝臟組織未出現(xiàn)病理學改變;與TCE致敏72 h組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織病理學改變明顯減輕,肝細胞水腫減輕。肝功能檢測結果顯示,與溶劑對照組相比,sCD59-Cys對照組小鼠血清ALT、AST水平無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),TCE+sCD59-Cys致敏72 h組ALT、AST水平明顯升高(P0.05);與TCE致敏72 h組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組ALT、AST水平明顯降低(P0.05)。7.sCD59-Cys降低TCE致敏小鼠肝臟MAC沉積水平免疫組織化學法檢測顯示,sCD59-Cys對照組小鼠肝臟組織無MAC沉積;與溶劑對照組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組有明顯可見MAC沉積,組化評分差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);但與TCE致敏72 h組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織MAC沉積水平明顯降低,組化評分差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。8.sCD59-Cys抑制TCE致敏小鼠肝臟NF-κB信號通路及炎癥水平免疫印跡結果顯示,溶劑對照組和sCD59-Cys對照組小鼠肝臟組織P-IκBα及核NF-κB p65蛋白表達水平無明顯差異(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏72 h組和TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織P-IκBα及核NF-κB p65蛋白表達水平明顯升高(P0.05);與TCE致敏72 h組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織P-IκBα及核NF-κB p65蛋白表達水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。實時定量RT-PCR結果顯示,與溶劑對照組相比,sCD59-Cys對照組小鼠肝臟組織TNF-α和IL-1βmRNA轉錄水平均無明顯差異(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織TNF-α和IL-1βmRNA轉錄水平明顯升高(P0.05);與TCE致敏72 h組相比,TCE+sCD59-Cys致敏72 h組肝臟組織TNF-α和IL-1βmRNA轉錄水平明顯降低(P0.05)。結論1.補體調節(jié)蛋白CD59a參與了TCE致敏小鼠免疫性肝損傷過程;2.TCE致敏小鼠免疫性肝損傷過程中存在NF-κB信號通路的活化;3.重組蛋白sCD59-Cys可能通過抑制MAC的形成進而抑制NF-κB信號通路活化發(fā)揮對TCE致敏小鼠肝臟損傷的保護作用。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R135

【參考文獻】

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本文編號：2633139