發(fā)布時間：2020-04-11 16:18

【摘要】：本研究以大鼠離體心臟和人源心肌細胞為研究對象,觀察鄰苯二甲酸單乙基己基酯(MEHP)對心肌細胞的損傷作用,并進一步探究氧化應激和轉(zhuǎn)錄因子FOXO3a在MEHP所致心肌細胞損傷中的作用。第一部分:MEHP對心肌的損傷作用及氧化應激在其中的作用研究目的:以大鼠離體心臟和人源心肌細胞為研究對象,觀察MEHP對心肌細胞的損傷作用,并進一步探究氧化應激在MEHP所致心肌細胞損傷中的作用。方法:1.利用離體心臟灌流技術測定MEHP對大鼠離體心臟的損傷。2.細胞培養(yǎng)和細胞模型建立。3.利用MTT實驗檢測細胞存活率,DCFH-DA探針標記測定AC16細胞內(nèi)和離體心臟心肌細胞內(nèi)ROS水平,SCGE實驗測定細胞DNA損傷情況,流式細胞儀檢測細胞凋亡,全自動生化分析儀檢測細胞上清液和心臟灌流液中LDH含量,流式細胞儀檢測細胞線粒體膜電位,大鼠離體心臟固定、包埋及染色后在顯微鏡下觀察組織病理學變化。結果:1.MEHP可降低大鼠離體心臟左心室收縮及舒張功能、引起心率下降、大鼠心肌細胞膜受損、細胞ROS水平升高并可導致大鼠離體心臟組織發(fā)生病理學改變。2.MEHP引起AC16細胞存活率下降、細胞膜的毒性損傷、ROS水平升高、線粒體膜電位降低、DNA損傷、細胞凋亡率增加。3.抗氧化劑NAC可減弱MEHP所致的心臟損傷。4.NAC可減弱MEHP引起的AC16細胞的毒性損傷。第二部分:FOXO3a在MEHP所致AC16細胞氧化應激和凋亡中的作用目的:觀察FOXO3a在MEHP所致AC16細胞氧化應激和凋亡損傷中的作用。方法:1.利用免疫熒光技術對FOXO3a和P-FOXO3a蛋白在細胞中表達及核轉(zhuǎn)位情況進行觀察。2.Lipofectamine 2000瞬時轉(zhuǎn)染FOXO3a TM或si RNA FOXO3a建立FOXO3a高、低表達細胞株,并對FOXO3a高、低表達細胞株進行鑒定。3.運用流式細胞儀檢測FOXO3a高、低表達細胞株經(jīng)MEHP處理后ROS水平和細胞凋亡的變化。4.熒光定量PCR及Western blot測定單純MEHP處理組、FOXO3a高、低表達細胞株經(jīng)MEHP處理組細胞中FOXO3a、Mn-SOD、ARC的mRNA及蛋白表達情況的變化。結果:1.MEHP處理后AC16細胞中FOXO3a、Mn-SOD、ARC mRNA及蛋白表達升高,P-FOXO3a蛋白表達下降。2.經(jīng)PCR和western鑒定,FOXO3a高、低表達細胞株建立成功。3.FOXO3a高表達后經(jīng)MEHP處理的AC16細胞與空質(zhì)粒MEHP處理的AC16細胞相比,ROS水平降低,細胞凋亡率下降,FOXO3a、Mn-SOD和ARC mRNA及蛋白進一步升高。4.FOXO3a低表達后經(jīng)MEHP處理的AC16細胞與siRNA Control MEHP處理的AC16細胞相比,ROS水平升高,細胞凋亡率升高,FOXO3a、Mn-SOD、ARC mRNA及蛋白表達下降,但與FOXO3a低表達對照組相比FOXO3a、Mn-SOD、ARC mRNA及蛋白表達未發(fā)生明顯變化。結論1.MEHP對離體大鼠心臟和人源心肌AC16細胞具有明顯的損傷作用。2.氧化應激參與MEHP所致的心肌細胞損傷。3.FOXO3a參與調(diào)控MEHP所致的AC16細胞氧化應激和凋亡損傷。
【圖文】：

22圖 1 MEHP 對左心室心肌收縮力（LVP）的影響1 Effect of MEHP on Left ventricular myocardial contractilit

圖 1-3 MEHP 對大鼠離體心臟心率的影響Fig.1-3 MEHP rat heart rate in vitro heartCompared with the corresponding 0 min: *P<0.05
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：2623786