發(fā)布時(shí)間：2020-04-06 11:38

【摘要】：目的諾如病毒(Noroviruses,No Vs)是導(dǎo)致非細(xì)菌性急性胃腸炎最主要的病原體,新鮮果蔬(生菜、草莓等)是傳播No Vs的重要載體。本文通過(guò)高通量測(cè)序?qū)贾菔心侈r(nóng)田生菜和土壤中的核心菌群進(jìn)行分析,利用平板分離分離培養(yǎng)生菜表面細(xì)菌,并篩選組織血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)陽(yáng)性細(xì)菌,檢測(cè)高溫和紫外消毒作用下HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)GⅡ.4型No Vs耐受力的影響,以及紫外照射和高溫種植環(huán)境下HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)GⅡ.4型No Vs在生菜上殘留以及感染力的影響,為果蔬表面No Vs的預(yù)防與清除提供理論依據(jù)。方法1、利用高通量測(cè)序分析杭州市某農(nóng)田生菜表面和土壤中的核心菌群,并通過(guò)平板分離培養(yǎng)生菜表面細(xì)菌,16Sr DNA鑒定并繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。2、通過(guò)懸浮試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌對(duì)GⅡ.4型No Vs的吸附力,并利用透射電子顯微鏡確定病毒的吸附部位;使用ELISA的方法篩選細(xì)菌HBGAs。3、利用RT-q PCR以及RNase處理結(jié)合RT-q PCR的方法測(cè)定紫外線、高溫消毒下HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)No Vs耐受力的影響。4、紫外消毒生菜葉,通過(guò)點(diǎn)接種的方式染菌處理,利用RT-q PCR以及RNase處理結(jié)合RT-q PCR的方法檢測(cè)紫外線照射和高溫種植環(huán)境下HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)生菜表面No Vs殘留以及感染力的影響。結(jié)果1、生菜樣本核心菌群主要以假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、節(jié)桿菌屬、希瓦氏菌屬和血桿菌屬等為主;土壤樣本主要以節(jié)桿菌屬、酸桿菌屬、鞘氨醇單胞菌屬、腎桿菌屬、假單胞菌屬等為主。分離得到的25株細(xì)菌主要包括7株假單胞菌屬細(xì)菌、4株微桿菌屬細(xì)菌、3株鞘氨醇桿菌屬細(xì)菌和3株短狀桿菌屬細(xì)菌等。2、從生菜樣本中分離得到的細(xì)菌對(duì)GⅡ.4型No Vs都有一定的吸附力,病毒主要吸附于細(xì)菌胞體,大部分細(xì)菌可表達(dá)HBGAs。3、紫外消毒作用下,細(xì)菌對(duì)No Vs的耐受力有影響(p0.05),細(xì)菌能增強(qiáng)No Vs的耐受力;高溫消毒作用下,從核酸量變化角度來(lái)看,假單胞菌屬細(xì)菌SC006和SC023、鞘氨醇桿菌屬細(xì)菌SC015對(duì)No Vs的耐受力有影響(p0.05),而從病毒完整性角度來(lái)看,細(xì)菌對(duì)No Vs耐受力的影響與陰性對(duì)照組相比無(wú)明顯差別(p0.05)。4、紫外線照射下,與陰性對(duì)照組相比,沃氏菌屬細(xì)菌SC042對(duì)生菜上No Vs的殘留有影響(p0.05),鞘氨醇桿菌屬細(xì)菌SC015和沃氏菌屬細(xì)菌SC042對(duì)生菜上No Vs的感染力有影響(p0.05);37°C高溫種植環(huán)境下,7d以內(nèi)細(xì)菌對(duì)No Vs在生菜表面的殘留以及感染力沒(méi)有影響(p0.05)。結(jié)論生菜樣本菌群豐富,核心菌群主要以假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、節(jié)桿菌屬、希瓦氏菌屬、血桿菌屬等為主與土壤核心菌群存在較大差異。分離出的25株細(xì)菌大部分對(duì)No Vs具有一定吸附力并且普遍可表達(dá)HBGAs。在紫外消毒過(guò)程中,細(xì)菌能提高No Vs的耐受力。90°C高溫消毒下,部分細(xì)菌能延緩病毒核酸被破壞降解,但病毒對(duì)高溫的耐受力并無(wú)多大變化。在37°C高溫生長(zhǎng)環(huán)境下,7d以內(nèi)HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)No Vs在生菜表面的殘留以及感染力沒(méi)有影響。在紫外照射下,某些HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)生菜表面No Vs的殘留以及感染力有影響,HBGAs陽(yáng)性細(xì)菌可能有利于生菜上No Vs的食源性傳播。
【圖文】：

圖 1-1 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖HUR 軟件對(duì)獲得的序列按 97%的序列相似度進(jìn)行歸并和 OT中豐度最高的序列作為該 OTU 的代表序列，隨后計(jì)算兩樣本圖展現(xiàn)生菜樣本與土壤樣本之間共有的和獨(dú)有的 OTU 所占菜與土壤之間共有的 OTU 有 88 個(gè)，生菜上獨(dú)有的 OTU 有U 有 1620 個(gè)，表明采樣的生菜上微生物群落與其種植地土壤差異。圖 1-2 OTU 維恩圖

圖 1-1 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖 軟件對(duì)獲得的序列按 97%的序列相似度進(jìn)行最高的序列作為該 OTU 的代表序列，隨后計(jì)現(xiàn)生菜樣本與土壤樣本之間共有的和獨(dú)有的 土壤之間共有的 OTU 有 88 個(gè)，生菜上獨(dú)有1620 個(gè)，表明采樣的生菜上微生物群落與其種。
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R155.5

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1 郭靜;劉云;孫梅;許玲芬;;兒童諾如病毒感染臨床特征分析[J];臨床軍醫(yī)雜志;2019年02期

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本文編號(hào)：2616461