【摘要】：酪氨酸殘基極易被氧化修飾,其氧化產(chǎn)物雙酪氨酸(DT)、3-硝基酪氨酸(3-NT)是體內(nèi)組織氧化損傷的標識。食入酪氨酸氧化產(chǎn)物是否影響體內(nèi)DT、3-NT的積累尚不清楚。本課題用酪氨酸氧化的產(chǎn)物對大鼠進行急性毒性實驗、28天蓄積實驗和長期飼喂實驗,探討酪氨酸氧化產(chǎn)物對大鼠心肌氧化還原狀態(tài)、血壓變化與心肌膠原代謝的影響,并研究心肌能量代謝、膠原代謝相關通路。參照Kurahashi的方法制備酪氨酸氧化產(chǎn)物(Tyrosine oxidized products,TOP)。主要研究內(nèi)容如下:1.小鼠急性毒性試驗:雌雄大鼠各10只,體重110 g-120 g,每只大鼠一次灌胃5000 mg/kg·bw的酪氨酸氧化產(chǎn)物,觀察大鼠的中毒癥狀并記錄死亡數(shù)量。2.28天蓄積性毒性實驗:雌雄大鼠各40只,每組8只,分別灌胃(生理鹽水、酪氨酸50 mg/kg·bw、氧化酪氨酸50 mg/kg·bw、250 mg/kg·bw、1250 mg/kg·bw)連續(xù)灌胃28天,每周測定大鼠體重及采食量的變化,28天后測定血液生化指標以及心肌氧化還原指標。3.大鼠飼喂實驗:分為正常飼料日糧組(Control)、0.44%酪氨酸組(Tyr)、0.22%氧化酪氨酸組(TOP1)、0.44%氧化酪氨酸組(TOP2)。實驗23周末測定大鼠尾動脈壓;在實驗第6、12、24周末分批測定心肌氧化還原指標;24周時測定心肌特異酶活、血管活性物質(zhì)、心肌膠原代謝相關指標、游離脂肪酸(FFA)和總三磷酸腺苷酶(T-ATPase)的變化情況;并觀察心肌纖維及線粒體超微結構;采用實時熒光定量PCR檢測心肌氧化還原相關基因、p38MAPK通路對膠原降解、脂代謝的相關基因表達。論文主要結果如下:1.實驗期間大鼠未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡情況,受試樣品對雄性及雌性大鼠的最大有作用劑量均高于5000 mg/kg·bw。依據(jù)急性毒性分級標準,樣品的急性毒性級別為實際無毒。2.28天蓄積毒性實驗:從每周體重變化可得,雄性大鼠在250 mg/kg與生理鹽水組和酪氨酸組差異顯著(P0.05),雌鼠在1250 mg/kg·bw與生理鹽水組和酪氨酸組相比差異顯著(P0.05);采食量方面,雌鼠第二周時在250 mg/kg·bw組與生理鹽水組和酪氨酸組相比出現(xiàn)差異(P0.05),而雄鼠第一周在1250 mg/kg·bw出現(xiàn)差異(P0.05);血液生化指標中雄鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均在250 mg/kg·bw組差異顯著(P0.05),尿素氮、肌酸激酶及其同工酶均是在1250 mg/kg·bw組出現(xiàn)差異(P0.05);而雌鼠的血液各項生化指標均是在TOP3-1250 mg/kg·bw組出現(xiàn)差異。灌胃酪氨酸1250 mg/kg·bw的大鼠血液及心肌自由基(ROS)、丙二醛(MDA)、雙酪氨酸(DT)、終末蛋白氧化產(chǎn)物(AOPP)含量與生理鹽水組及酪氨酸組相比均顯著升高(P0.05);心肌過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)顯著降低(P0.05)�？傻霉辔�28天酪氨酸氧化產(chǎn)物導致大鼠出現(xiàn)明顯的臨床毒性癥狀的劑量小于1250 mg/kg·bw,主要靶器官為肝、腎、心。3.飼喂氧化酪氨酸6周起,TOP2組大鼠心肌總抗氧化能力(T-AOC)、CAT、超氧化物歧化酶(SOD)、GSH-Px顯著降低(P0.05);到24周末時,TOP2組大鼠心肌T-AOC、CAT、SOD、GSH-Px、GSH/GSSG均顯著降低(P0.05);呈現(xiàn)周期效應;6周起,TOP2組大鼠心肌ROS、DT、MDA、PC(羰基)、AOPP顯著升高(P0.05);持續(xù)到24周末并呈現(xiàn)周期效應;Real-time PCR結果顯示,飼喂酪氨酸氧化產(chǎn)物24周末的大鼠心肌Nrf2、Trx-1、NF-κB、AP-1表達均顯著上調(diào)(P0.05)。4.TOP2組大鼠23周末時舒張壓、收縮壓及平均壓顯著高于正常組和酪氨酸組(P0.05);血流量、血流速顯著降低(P0.05);酪氨酸氧化產(chǎn)物TOP組大鼠與正常組和酪氨酸組相比,血管緊張素II(Ang II)顯著升高(P0.05),一氧化氮(NO)顯著降低(P0.05)。5.飼喂酪氨酸氧化產(chǎn)物24周后,TOP組大鼠血漿肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性及心�、裥湍z原羧基端肽(ⅠCTP)、Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNP)含量顯著升高(P0.05),均呈劑量效應;膠原降解相關基因及炎性因子TIMP-1、TIMP-2、PDGFB、IL-1、IL-6、TNF-α表達顯著上調(diào)(P0.05),MMP-2,MMP-9表達顯著下調(diào)(P0.05);心肌電鏡結果觀察到,大鼠的心肌纖維斷裂溶解,線粒體腫大,空泡形成等異常出現(xiàn);此外,大鼠心肌總ATP酶活下降,心肌游離脂肪酸FFA生成增多;Real-time PCR結果顯示,TOP2組大鼠心肌SITR1、PGC1-α、PPAR-α、ERRα表達顯著下調(diào)(P0.01);同時,TOP組大鼠心肌FFA含量提高,T-ATPase活性降低(P0.05),均呈劑量效應。6.心肌組織中Trx-1、TNF-α、PDGFB表達量分別與心肌組織ROS、DT、MDA、AOPP水平顯著正相關;SIRT1、PPAR-α表達量分別與心肌組織ROS、DT、MDA以及AOPP水平均呈顯著負相關(P0.05)。短期及長期攝入氧化酪氨酸均會造成大鼠心肌氧化還原狀態(tài)失衡,心肌氧化產(chǎn)物積累,導致心肌組織的氧化損傷。且隨著時間和劑量的增加,損傷愈加嚴重。長期飼喂氧化酪氨酸日糧會導致血壓升高、膠原合成及降解異常、心肌能量代謝異常等心衰的趨勢。
【圖文】：

圖 1-1 體內(nèi)體外產(chǎn)生·OH 的過程Fig.1-1 The process of·OH produced in vivo and in vitro） 是脂質(zhì)過氧化作用的次級產(chǎn)物，其含量常被用來的程度。而脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如 MDA，可與游離氨生交聯(lián)，導致蛋白質(zhì)的氧化，同時能夠激發(fā)自由基

圖 1-2 MDA 介導蛋白質(zhì)生成羰基-2 Formation of protein carbonyls by reaction with MDA酸及蛋白質(zhì)結構的影響酸殘基，引起蛋白質(zhì)結構的改變，，造成肽鍵斷飾
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R151

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本文編號：2542828