【摘要】：[研究目的] 本文將非洲爪蟾染毒不同濃度的阿特拉津,在2個不同時間點進行取樣,分析和探討阿特拉津對西棲類生存和發(fā)育的毒性。運用全基因組表達譜芯片技術篩選性腺組織的敏感基因和對性腺產(chǎn)生發(fā)育毒性可能存在的細胞信號通路；運用Real time RT-PCR技術分析阿特拉津對肝臟相關基因表達的影響,研究阿特拉津對非洲爪蛾肝臟的毒性作用。運用以上兩種方法初步探索阿特拉津對非洲爪蟾發(fā)育毒性作用的機制。 [研究方法] 本次實驗設對照組和4個阿拉津染毒組,分別是0.1、1、10和100μg/I.組,每組隨機挑選30只非洲爪蟾蝌蚪。實驗結束時,取非洲爪蟾的性腺和肝臟組織,進行稱重和基本形態(tài)觀察,并迅速置于液氮中保存。運用非洲爪蟾全基因組表達譜芯片和Real time RT-PCR技術,對性腺組織進行敏感基因和細胞信號通路的篩選,對肝臟組織進行相關基因表達的研究。 [研究結果] 1阿特拉津對非洲爪蟾一般生長發(fā)育情況的影響 阿特拉津對非洲爪蟾的體長、體重、性腺重沒有顯著影響(p0.05),0.1、1、10μg/L組的肝臟重量顯著降低(p0.05)；10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高(p0.05)：0.1和100μ/L阿特拉津組的蝌蚪完成變態(tài)的時間較長于其他組,但差異無顯著性(p0.05)；變態(tài)完成后,性別比沒有發(fā)生顯著變化(p0.05)；0.1、1、10和100μg/L劑量組均有雄性性腺出現(xiàn)不連續(xù)發(fā)育,存在不同程度的斷裂。 2阿特拉津對雄性非洲爪蟾性腺敏感基因和細胞信號通路的篩選 通過GO分析,在分子功能、生物過程和細胞組成三個部分獲得了差異基因聚集的多條功能條目。通過Pathway分析,我們得到了6條差異顯著的細胞信號通路,分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復通路、核黃素代謝通路和孕酮介導的卵母細胞成熟通路。 3阿特拉津對非洲爪蟾肝臟相關基因表達的影響 阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾的AR水平顯著增高(p0.05),使100μg/L組非洲爪蟾HSP90表達水平顯著升高(p0.05)，而對VTG、ER、HSP70和GR的表達水平無顯著性影響(p0.05)。 [研究結論] 1阿特拉津使0.1、1、10μg/L組非洲爪蟾的肝臟重量顯著降低,10、100μg/L染毒組肝臟系數(shù)有所升高,對其他一般生長情況無顯著影響；阿特拉津在一定程度上抑制了非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)；性別比沒有明顯變化；各組均有發(fā)育不連續(xù)的雄性性腺,出現(xiàn)異常節(jié)段。 2阿特拉津對雄性非洲爪蟾性腺產(chǎn)生發(fā)育毒性可能與6條細胞信號通路相關,分別是精氨酸和脯氨酸能量代謝通路、細胞周期通路、剪接體通路、堿基切除修復通路、核黃素代謝通路和孕酮介導的卵母細胞成熟通路。G0分析后獲得差異功能聚集的多條功能條目。 3阿特拉津使100μg/L組雄性非洲爪蟾肝臟內(nèi)AR水平顯著增高,使100μg/L組非洲爪蟾HSP90表達水平顯著升高,而對VTG、ER、HSP70和GR的表達水平無顯著性影響。
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R114

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本文編號：2534349