【摘要】：水是生命之源，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，環(huán)境污染的問(wèn)題越來(lái)越突出，水體污染成為人的安全和健康的重大威脅。監(jiān)測(cè)水體污染情況，控制水體質(zhì)量，日益受到人們的關(guān)注，特別是對(duì)水體綜合毒性的評(píng)價(jià)，成為水質(zhì)監(jiān)控的重要內(nèi)容。對(duì)于水體中微生物毒素的檢測(cè)，物理、化學(xué)方法應(yīng)用不便，而傳統(tǒng)的水體綜合評(píng)價(jià)存在耗時(shí)長(zhǎng)、成本高、重復(fù)性差的缺陷。本文的研究目的是利用費(fèi)氏弧菌發(fā)光來(lái)檢測(cè)水中的微生物毒素和水體的綜合毒性，打破傳統(tǒng)方法的局限，為建立水質(zhì)監(jiān)控的新方法開辟新的思路。 本課題研究了費(fèi)氏弧菌培養(yǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、搖床轉(zhuǎn)速和接種量的關(guān)系，探索了費(fèi)氏弧菌凍干粉制備與凍干保護(hù)劑及其用量的關(guān)系，并對(duì)費(fèi)氏弧菌的培養(yǎng)條件和凍干粉制備條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定了費(fèi)氏弧菌凍干粉的制備條件：ISO11348標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基；培養(yǎng)溫度為28℃；轉(zhuǎn)速為250rpm；接種量為OD600=0.015-0.025；凍干保護(hù)劑為0.2mg/L蔗糖溶液；保護(hù)劑用量為2%（體積比），所得凍干粉的穩(wěn)定性和敏感性均達(dá)到商業(yè)化應(yīng)用水平。應(yīng)用本課題中制得的凍干粉檢測(cè)重金屬離子和有機(jī)溶劑的毒性，表明費(fèi)氏弧菌發(fā)光強(qiáng)度抑制率與這些物質(zhì)的濃度呈正相關(guān)，抑制率為20%-80%時(shí)，抑制率與濃度對(duì)數(shù)值呈線性關(guān)系。 本課題首次探討了費(fèi)氏弧菌發(fā)光與微生物毒素——黃曲霉毒素的關(guān)系：黃曲霉毒素濃度的對(duì)數(shù)值與費(fèi)氏弧菌發(fā)光的抑制率呈線性關(guān)系，依據(jù)所得的回歸方程可以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)不同微生物產(chǎn)毒素的情況：6株不同來(lái)源的黃曲霉菌株產(chǎn)毒素的水平，以黃曲霉毒素含量表示的毒素量在14.94－46.45mg/L之間；1株米曲霉不產(chǎn)毒素。費(fèi)氏弧菌發(fā)光強(qiáng)度的改變可以較準(zhǔn)確地反映微生物產(chǎn)毒素的能力，尤其是微生物產(chǎn)黃曲霉毒素的能力，這為在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中快速檢測(cè)黃曲霉毒素提供了新的線索，有望發(fā)展成為一種檢測(cè)黃曲霉毒素的新技術(shù)。
【圖文】：

且重復(fù)性較差。針對(duì)傳統(tǒng)生物毒性檢測(cè)方法的不足之處，發(fā)光細(xì)菌法成為取代傳統(tǒng)生物毒性檢測(cè)的新型生物毒性監(jiān)測(cè)技術(shù)。該方法以簡(jiǎn)便的操作方式、測(cè)量結(jié)果一目了然受到了科研單位和企業(yè)的青睞。自 1672 年 R.Boyle 觀察到發(fā)光的菌體的發(fā)光會(huì)受到化學(xué)物質(zhì)抑制的后，針對(duì)細(xì)菌的發(fā)光效應(yīng)的研究大量出現(xiàn)。本世紀(jì) 70、80 年代，發(fā)光細(xì)菌第一次從魚類體表分離得到，并用于生物毒性檢測(cè)。80 年代我國(guó)開始引進(jìn)這一技術(shù),主要是以海洋發(fā)光細(xì)菌為主用于環(huán)境污染物的急性生物毒性檢測(cè)。另外從青海湖中分離到淡水型發(fā)光細(xì)菌(青�；【�)，擴(kuò)寬了發(fā)光細(xì)菌應(yīng)用的范圍。現(xiàn)已成為一種簡(jiǎn)單、快速檢測(cè)生物毒性的手段。一般發(fā)光細(xì)菌長(zhǎng)約 1.5-3um（微米），寬度 0.5-0.8um，因此肉眼根本看不到，要用顯微鏡放大至 1 千倍時(shí)方可以分辨它們的體形。而它們的發(fā)光，也要在特定的條件中才能看得見(jiàn)。發(fā)光細(xì)菌發(fā)光的原理：發(fā)光細(xì)菌最特別的生理代謝特征是在其生長(zhǎng)的一定時(shí)間內(nèi)，能夠發(fā)射可見(jiàn)光，，發(fā)光的原理與螢火蟲的發(fā)光有點(diǎn)類似，但并不相同。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，細(xì)菌發(fā)光可概括如圖 1-1：

圖 4-1 黃曲霉毒素 B1對(duì)費(fèi)氏弧菌發(fā)光的抑制效應(yīng)Fig. 4-1 Inhibitory effect of aflatoxin B1on V. fischeri luminescence. A: the relationship between aflatoxconcentration and luminescence inhibition of V. fischeri; B: the relationship between the logarithmic vaof aflatoxin concentration and luminescence inhibition of V. fischeri. Points represent means, vertical bashow SD mean(n=3).本研究同時(shí)檢測(cè)了黃曲霉毒素在費(fèi)氏弧菌活化液中作用 5min、15min 和 30min 時(shí)氏弧菌發(fā)光的抑制率，結(jié)果表明 5min 時(shí)抑制率太小，15min 和 30min 的抑制率均大5min 時(shí)的抑制率，鑒于不同毒性物質(zhì)對(duì)費(fèi)氏弧菌發(fā)光產(chǎn)生影響的速度不同，本研究黃曲霉毒素作用 30min 時(shí)的數(shù)據(jù)作為定量研究的數(shù)據(jù)[73]。這一結(jié)果也與用該費(fèi)氏弧菌凍干檢測(cè) Zn2+的結(jié)果相一致。4.3.3 黃曲霉培養(yǎng)上清液中微生物毒素的定性理論上采用的六株曲霉菌均是黃曲霉毒素產(chǎn)生菌，所產(chǎn)微生物毒素為黃曲霉毒素為了驗(yàn)證對(duì)費(fèi)氏弧菌發(fā)光強(qiáng)度產(chǎn)生抑制的微生物毒素確實(shí)為黃曲霉毒素，根據(jù)黃曲霉
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R123.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2526409