【摘要】：目的建立檢測(cè)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特菌和小腸耶爾森氏菌5種致病菌的多重直接PCR方法。方法根據(jù)大腸桿菌phoA、沙門氏菌invA、金黃色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小腸耶爾森氏菌ail的基因序列,設(shè)計(jì)多重直接PCR引物,建立并優(yōu)化多重直接PCR反應(yīng)條件,檢測(cè)引物的擴(kuò)增特異性和靈敏性,并將所建立的方法應(yīng)用于實(shí)際采集豬肉樣本的檢測(cè),與金標(biāo)培養(yǎng)法相比較,計(jì)算多重直接PCR檢測(cè)法的敏感性、準(zhǔn)確性以及陽性預(yù)測(cè)值。結(jié)果所設(shè)計(jì)的多重直接PCR引物對(duì)5種菌都有特異擴(kuò)增,最低檢出限量大腸桿菌為10CFU,金黃色葡萄球菌敏感性為100CFU,沙門氏菌、李斯特菌、小腸耶爾森氏菌敏感性可達(dá)1CFU。60份豬肉樣本中檢出大腸桿菌15份、沙門氏菌6份、金黃色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小腸耶爾森氏菌35份,陽性檢出率均高于金標(biāo)培養(yǎng)法,總體檢測(cè)敏感性為100%,準(zhǔn)確性為94%,陽性預(yù)測(cè)值為81.44%。結(jié)論多重直接PCR法實(shí)現(xiàn)了同時(shí)對(duì)各食源性致病菌敏感特異的檢測(cè),并且省去了提取模板的步驟,將檢測(cè)時(shí)間縮短至3h左右,便于食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)中常見食源性致病菌的通量檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish a multiplex direct PCR method for the detection of E. coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and Yelseng small intestine. Methods according to the gene sequence of E. coli phoA, Salmonella aureus invA, Staphylococcus aureus nuc, hly, ail, multiple direct PCR primers were designed, the multiplex direct PCR reaction conditions were established and optimized, and the amplification specificity and sensitivity of the primers were detected. The established method was applied to the detection of pork samples and compared with the gold standard culture method. The sensitivity, accuracy and positive predictive value of multiple direct PCR detection were calculated. Results the designed multiplex direct PCR primers were specifically amplified to all five kinds of bacteria. The minimum detection limit of Escherichia coli was 10 CFU, Staphylococcus aureus sensitivity was 100 CFU, salmonella, Listeria monocytogenes, Yelseng small intestine were as sensitive as 15 E. coli, 6 Salmonella, 21 Staphylococcus aureus, 20 Listeria monocytogenes and 35 Yelseng small intestine samples, among which 15 were Escherichia coli, 6 were Salmonella, 21 were Staphylococcus aureus, 20 were Listeria, 35 were Yelseng, and 15 were E. coli, 6 were Salmonella, 21 were Staphylococcus aureus, 21 were Staphylococcus aureus, 20 were Staphylococcus aureus, and 35 were Yelsonia. The positive detection rate was higher than that of gold standard culture method. The overall sensitivity, accuracy and positive predictive value were 100%, 94% and 81.44%, respectively. Conclusion multiple direct PCR method realizes the sensitive and specific detection of food-borne pathogenic bacteria at the same time, and saves the step of extracting template, and shortens the detection time to about 3 hours, which is convenient for the flux detection of common food-borne pathogenic bacteria in food safety risk monitoring.
【作者單位】： 中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(青島);吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：農(nóng)業(yè)部“國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重大專項(xiàng)”(No.GJFP2016007)資助 留學(xué)人員科技活動(dòng)項(xiàng)目擇優(yōu)資助~~
【分類號(hào)】：R155.5

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本文編號(hào)：2508737