【摘要】：鉛（Pb）自然界中廣泛存在，鉛及其多數(shù)化合物是一種不可降解的環(huán)境污染物。鉛對生物體具有多方面的毒性，可以對人體多個器官，系統(tǒng)造成損害。心血管疾病是目前嚴重危害我國人民健康和生命的一大疾病，大量研究證明，高血壓是這種疾病最重要的危險因素之一。近年來，研究發(fā)現(xiàn)鉛可以顯著升高動物血壓，流行病學(xué)調(diào)查也證明鉛與高血壓和動脈硬化具有顯著的相關(guān)性。鉛對高血壓和動脈硬化中作用性機制研究甚少。 增殖細胞核抗原（Proliferating Cell NuclearAntigen簡稱PCNA）是一種與細胞DNA合成關(guān)系密切蛋白質(zhì)，可以作為評價細胞增殖狀態(tài)的一個良好指標。B細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2簡稱Bcl-2）是一種原癌基因，它具有抑制細胞凋亡的作用。Bax可以促進細胞凋亡，一般而言，Bcl-2和Bax是一對正負凋亡調(diào)節(jié)蛋白。Bcl-2/Bax比值越低，細胞越容易發(fā)生凋亡，否則反之。 目的：本實驗是以SD大鼠低水平鉛暴露為模型，觀察暴露于鉛40天后，SD大鼠血管組織增殖、凋亡的情況，觀察鉛暴露對血管危害，探討鉛對血管損傷分子生物學(xué)機制。 方法： 1實驗動物 選取健康，3-4周齡，體重在99-114g的SD大鼠24只。實驗動物由河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。 2實驗試劑 乙酸鉛終濃度為1％。 3實驗分組 將SD大鼠按隨機數(shù)字法分為正常組和實驗組，對照組12只，實驗組12只。實驗組飲用含1％乙酸鉛水，對照組只飲用自來水，40天后處死。 4用HE染色法觀察SD大鼠血管組織學(xué)變化。 5用Western blot印記法檢測SD大鼠血管中增殖蛋白PCNA、凋亡蛋白Bcl-2和Bax，結(jié)果使用計算機半定量技術(shù)進行分析。 6用免疫組織化學(xué)法檢測SD大鼠血管中增殖蛋白PCNA、凋亡蛋白Bcl-2和Bax，結(jié)果使用計算機免疫組化圖像分析技術(shù)進行分析。 結(jié)果： 1大鼠血管組織學(xué)變化 實驗組大鼠血管管腔擴張，管壁皺褶減少，胞核皺縮，彈性膜皺褶較對照組拉直。 2大鼠血管中增殖蛋白PCNA表達的影響 Western blot結(jié)果顯示，1%乙酸鉛喂養(yǎng)40天后SD大鼠血管中的PCNA蛋白表達量與正常對照組比較有顯著差異，其表達量明顯減少。計算機Western blot圖像半定量分析，結(jié)果可見：染鉛組大鼠PCNA蛋白的平均灰度值顯著低于正常對照組（P0.05）。說明染鉛可以降低大鼠血管組織中PCNA蛋白的表達量。免疫組化結(jié)果顯示，PCNA蛋白免疫組化反應(yīng)物呈棕黃色，主要表達于SD大鼠血管平滑肌細胞的胞核中，實驗組的棕黃色顆粒明顯多于相應(yīng)的正常對照組。 計算機免疫組化圖像分析表明，平均光密度（mean density）的比較中，染鉛組樣本的平均光密度值均低于對照組，其差別有顯著性差異（P0.05）。說明染鉛可以降低PCNA在大鼠血管組織中表達強度。 3鉛對SD大鼠血管中凋亡蛋白Bcl-2表達的影響 Western blot結(jié)果顯示，1%乙酸鉛喂養(yǎng)40天后SD大鼠血管中的Bcl-2蛋白表達量與正常對照組比較有顯著差異，其表達量明顯減少。計算機Western blot圖像半定量分析，結(jié)果可見：實驗組大鼠Bcl-2蛋白的平均灰度值顯著低于正常對照組（P0.05）。說明染鉛可以降低大鼠血管組織中Bcl-2蛋白的表達量。 免疫組化結(jié)果顯示，，Bcl-2凋亡蛋白免疫組化反應(yīng)物呈棕黃色，主要表達于SD大鼠血管平滑肌細胞的胞漿中，實驗組的棕黃色顆粒明顯多于相應(yīng)的正常對照組。 計算機免疫組化圖像分析表明，平均光密度值（Mean density）的比較中，實驗組樣本的平均光密度值均低于對照組，其差別有顯著性差異（P0.05）。說明染鉛可以降低Bcl-2在大鼠血管組織中表達強度。 4鉛對SD大鼠血管中凋亡蛋白Bax表達的影響 Western blot結(jié)果顯示，1%乙酸鉛喂養(yǎng)40天后SD大鼠血管中的Bax蛋白表達量與正常對照組比較有顯著差異，其表達量明顯增加。 計算機Western blot圖像半定量分析，結(jié)果可見：實驗組大鼠Bax蛋白的平均灰度值顯著高于正常對照組（P0.05）。說明染鉛可以促進大鼠血管組織中Bax蛋白的表達。 免疫組化結(jié)果顯示，Bax凋亡蛋白免疫組化反應(yīng)物呈棕黃色，主要表達于SD大鼠血管平滑肌細胞的胞漿中，實驗組的棕黃色顆粒明顯多于相應(yīng)的正常對照組。 計算機免疫組化圖像分析表明，平均光密度值（Mean density）的比較中，實驗組樣本的平均光密度值均高于對照組，其差別有顯著性差異（P0.05）。說明鉛可以促進Bax在大鼠血管組織中表達強度。 結(jié)論： 1短期鉛暴露可使大鼠血管管腔擴張，管壁皺褶減少，胞核皺縮，彈性膜皺褶較對照組拉直。 2短期鉛暴露可以是PCNA蛋白表達減少，Bcl-2蛋白表達減低，Bax蛋白表達增高，Bcl-2/Bax比值降低，促進血管細胞凋亡。 3實驗組大鼠鉛暴露后，大鼠血管管腔擴張，彈性減弱，血管細胞異常凋亡可能是其中原因之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R114

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本文編號：2460593