【摘要】：由人糞便排入環(huán)境中的病毒已達(dá)140多種血清型,可導(dǎo)致胃腸炎、肝炎、發(fā)熱、腦膜炎、心肌炎等疾病,嚴(yán)重威脅到人類(lèi)健康。這些病毒在胃腸道復(fù)制,主要通過(guò)糞口途徑傳播,是導(dǎo)致水源性疾病的一個(gè)重要原因。1988年上海30萬(wàn)人暴發(fā)甲型肝炎病毒感染,系由于食用遭甲型肝炎病毒污染水體中養(yǎng)殖的毛蚶造成,1991印度的坎普爾由于使用了被戊型肝炎病毒污染的飲用水造成7.9萬(wàn)人感染戊型肝炎。近年來(lái)屢見(jiàn)飲水受到腸病毒(enteic virus)污染引起腸道傳染病爆發(fā)的報(bào)道。2007年廣東省東莞市一起173例不明原因腹瀉流行,經(jīng)調(diào)查證實(shí)為諾如病毒污染飲水所致。飲用水安全與人們的生產(chǎn)生活息息相關(guān),其病毒學(xué)安全性應(yīng)該引起學(xué)界與有關(guān)管理部門(mén)高度重視。 許多國(guó)家都采用糞便污染指示菌,例如糞大腸菌群、總大腸菌群、腸球菌等來(lái)評(píng)價(jià)水體的衛(wèi)生微生物學(xué)質(zhì)量包括病毒污染狀況。研究發(fā)現(xiàn)水環(huán)境的細(xì)菌學(xué)水平和病毒濃度之間無(wú)明顯相關(guān),同時(shí)病毒對(duì)外界環(huán)境和消毒作用的抵抗力更強(qiáng),在滿(mǎn)足水體細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的情況下仍能檢測(cè)到病毒。因此目前各國(guó)普遍采用的指示菌不能準(zhǔn)確反映水中病毒學(xué)安全性。直接對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)可以提供更可靠的水體病毒污染信息,進(jìn)一步確保用水安全。但是,迄今國(guó)內(nèi)外尚未制定飲水病毒學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和統(tǒng)一可行的水中病毒學(xué)檢測(cè)方法,根本原因在于其技術(shù)難度高、費(fèi)用昂貴、工作量大,涉入門(mén)檻高,基礎(chǔ)科研數(shù)據(jù)積累少。嚴(yán)重制約了飲用水病毒學(xué)研究在國(guó)內(nèi)的開(kāi)展。因此,本研究將從新材料、新配方、新的分子生物學(xué)檢測(cè)法多角度,探索建立可靠、有效的飲用水中病毒濃縮、檢測(cè)方法,并在制水生產(chǎn)實(shí)踐中檢驗(yàn)諸方法應(yīng)用效果。 僅就技術(shù)而言,首先環(huán)境水體中病毒濃度遠(yuǎn)比臨床病人感染樣本低,如果特指可能存在于飲用水中的病毒,兩者相差最大可達(dá)1017數(shù)量級(jí)。采用最靈敏的臨床檢測(cè)方法也無(wú)法對(duì)飲水中病毒進(jìn)行檢測(cè)。因此,欲開(kāi)展飲用水病毒學(xué)研究,必須面對(duì)水中病毒濃縮技術(shù)與設(shè)備的挑戰(zhàn)。目前濃縮水中病毒的方法有：微孔濾膜吸附法、硅藻土吸附法、氫氧化鋁吸附沉淀法等。但因?yàn)椴馁|(zhì)和材料物理化學(xué)性質(zhì)、洗脫液性質(zhì)、操作流程不同,導(dǎo)致各種濃集方法最終結(jié)果相差懸殊,使不同國(guó)家與地區(qū)結(jié)果缺乏可比性,難以統(tǒng)一,因此迫切需要探索建立一種高效、靈敏和簡(jiǎn)捷的濃縮方法。本研究在此方面進(jìn)行了初步嘗試,對(duì)比了國(guó)產(chǎn)微孔濾膜與進(jìn)口NanoCeram濾芯初次濃縮病毒的效率。NanoCeram濾芯是一種新型的正電濾芯,因此國(guó)外相關(guān)實(shí)際應(yīng)用的報(bào)道也相對(duì)較少。濾芯的表面積大500至600m2/g,能夠?qū)Σ煌瑵岫鹊拇篌w積水樣進(jìn)行有效濃縮,不需調(diào)節(jié)水樣的pH等處理,可直接進(jìn)行濃縮,操作過(guò)程簡(jiǎn)單,且價(jià)格僅為1MDS濾芯的1/5。本研究首次在國(guó)內(nèi)將此濾芯應(yīng)用于實(shí)際水樣病毒的濃縮,所獲實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為國(guó)內(nèi)今后利用該濾芯提供了良好的參考依據(jù)。 研究水中病毒的第二個(gè)技術(shù)難點(diǎn)在于,操作步驟繁雜,第一次濃縮后并不能直接檢驗(yàn)病毒,必須再進(jìn)行第二次濃縮,使其最終體積縮小到類(lèi)似于臨床標(biāo)本體積。第二次濃縮方法有,絮凝沉淀、透析、超速離心等,由于待濃縮樣本體積仍然較大,后兩種方法不太實(shí)用,主要采用絮凝沉淀法。絮凝劑有無(wú)機(jī)絮凝劑和有機(jī)絮凝劑,種類(lèi)繁多,理化性質(zhì)各異,尋找理想滿(mǎn)意的絮凝劑,需要具體問(wèn)題具體分析,開(kāi)展細(xì)致篩選研究。本研究探討了3種不同絮凝劑在二次濃縮中的最佳條件與效果,有機(jī)絮凝劑聚乙二醇擇優(yōu)而出。 濃縮過(guò)程結(jié)束,僅僅類(lèi)似于完成了臨床標(biāo)本的采集,隨之相應(yīng)的除菌、選擇敏感宿主接種樣本,觀察病毒復(fù)制接踵而至。但是,環(huán)境中病毒與臨床檢驗(yàn)巨大不同處是其多樣性,一個(gè)患者一般情況下只感染一種病毒,其實(shí)驗(yàn)室敏感宿主細(xì)胞范圍較窄,容易確定�？墒�,環(huán)境水體中濃縮的病毒,可能為一種,也可能有多種數(shù)十種,不同病毒有其特定的敏感宿主,這為最終檢測(cè)環(huán)境病毒帶來(lái)極大的工作量。另外,有的病毒不能用細(xì)胞檢測(cè),例如,諾如病毒,或有些病毒對(duì)細(xì)胞不敏感,例如,腺病毒F組40、41血清型,這為檢測(cè)環(huán)境病毒帶來(lái)極大不確定性。若要解決以上問(wèn)題,只能從分子生物學(xué)領(lǐng)域借助工具,基因探針和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)似乎能夠同時(shí)解決以上難題,但是基因探針因其靈敏度太低,已被淘汰,而最新的熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)視乎可彌補(bǔ)上述所有不足。熒光定量PCR可對(duì)模板進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),精確對(duì)起始模板進(jìn)行定量,且檢測(cè)時(shí)間短,從病毒核酸提取到熒光定量PCR完成僅僅需要4-5小時(shí),熒光定量PCR檢測(cè)范圍寬,靈敏度高,特異性強(qiáng),顯示其在環(huán)境病毒學(xué)檢測(cè)中的巨大優(yōu)勢(shì)。盡管如此,對(duì)于具體的每一種病毒,qPCR技術(shù)并非唾手可得,針對(duì)不同病毒,其保守區(qū)引物設(shè)計(jì),內(nèi)標(biāo)構(gòu)建,擴(kuò)增產(chǎn)物特異性、檢測(cè)方法的靈敏度等,都需要探索研究。本研究針對(duì)不易培養(yǎng)的腺病毒F組40、41血清型、培養(yǎng)難度較大的A群輪狀病毒及具有普遍意義的整個(gè)腸道病毒屬,構(gòu)建了相應(yīng)的熒光定量PCR方法,成功實(shí)現(xiàn)對(duì)自來(lái)水廠水樣中相應(yīng)病毒的檢測(cè)。 國(guó)外研究顯示病毒普遍存在于各種水體,例如江、河、湖、海、地下水,乃至經(jīng)過(guò)凈化處理過(guò)的自來(lái)水都含有一定量的病毒。國(guó)內(nèi)有研究人員檢測(cè)了渤海中腸道病毒的污染情況,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)海水中腸道病毒濃度范圍為6.3×107拷貝/L至1.7×106拷貝/L,何等僅僅采集了2L水樣,發(fā)現(xiàn)輪狀病毒在北京水源水中的檢出率為34.6%,出廠水中的檢出率為11.7%,末梢水中的檢出率為22.4%。二十年前,張楚瑜等人對(duì)武漢東湖水廠腸道病毒進(jìn)行檢測(cè),原水病毒濃度均值為14.31PFU/L,陽(yáng)性率為60%,出廠水濃度均值為6.7PFU/L,陽(yáng)性率為35%,水廠水處理工藝對(duì)腸道病毒的去除率為53.18%。當(dāng)時(shí)東湖是武漢武昌區(qū)的主要飲用水水源,然而隨著東湖水污染的日益加重,最后不得不放棄將其作為飲用水水源,改用長(zhǎng)江水為唯一飲用水水源。武漢市是長(zhǎng)江與漢江匯聚的大都市,武漢受惠于兩江,但也可能遭受其害。原因在于,隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)突飛猛進(jìn)的發(fā)展,長(zhǎng)江、漢江環(huán)境污染負(fù)荷日益加重,有報(bào)道,僅2007年一年長(zhǎng)江就接受了300多億噸廢水。武漢有關(guān)部門(mén)最新公布資料,在武漢的18各水源保護(hù)地附近就有15處污水排放口,直接威脅到自來(lái)水廠取水安全。人們有理由為自己飲水的化學(xué)安全性、生物學(xué)安全性擔(dān)心。但是,有關(guān)利用長(zhǎng)江與漢江作為水源的各自來(lái)水廠原水、出廠水是否存在病毒污染,其變化規(guī)律如何,一直是有待解開(kāi)的迷。不僅如此,整個(gè)長(zhǎng)江流域200多個(gè)大中小城市,甚至全國(guó)縣以上4000多個(gè)水廠也幾乎很少開(kāi)展飲水病毒學(xué)研究。這種狀況與國(guó)際上同類(lèi)研究差距甚遠(yuǎn),無(wú)論從學(xué)術(shù)上還是從生產(chǎn)實(shí)踐中都需要急起直追。本研究對(duì)武漢市兩江共6個(gè)自來(lái)水廠病毒污染狀況開(kāi)展了一年四季的監(jiān)測(cè)調(diào)查,比較了出廠水與原水中腺病毒、輪狀病毒和腸道病毒的污染水平與去除率,考察了糞便污染指示菌、有關(guān)重要理化指標(biāo)與病毒滅活的關(guān)系,對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行了科學(xué)謹(jǐn)慎的評(píng)價(jià),填補(bǔ)了該領(lǐng)域的部分空白。 本研究主要包括下述三個(gè)部分： 第一部分飲用水中病毒濃縮方法的建立與比較 目的：測(cè)試評(píng)價(jià)NanoCeram濾芯對(duì)原水和飲用水中病毒初次濃縮的效果,比較無(wú)機(jī)絮凝Mg(OH)2法、有機(jī)絮凝法及PEG/NaCl對(duì)初次濃縮液進(jìn)行二次濃縮的效果。 方法初次濃縮：以f2噬菌體為腸病毒代表,將f2噬菌體投加入50L長(zhǎng)江、漢江混合原水中,配制模擬原水樣本,取100L實(shí)驗(yàn)室末梢水,Na2S2O3中和余氯后投加f2噬菌體,配制模擬飲用水樣本。檢測(cè)水樣的濁度、溫度、pH值,采用NanoCeram正電濾芯濃縮模擬原水和飲用水樣中病毒,采用3%牛肉浸膏溶液pH值9.5洗脫濾芯。調(diào)整洗脫液pH值為7.0即得初次濃縮液。二次濃縮方法的選擇：200ml 3%牛肉浸膏溶液(pH值9.5)中加入一定量f2噬菌體,配制二次濃縮模擬樣。比較無(wú)機(jī)絮凝(Mg(OH)2)法、有機(jī)絮凝法及聚乙二醇(PEG)/NaCl法對(duì)病毒進(jìn)行二次濃縮效果差異。無(wú)機(jī)絮凝法：在模擬水樣中加入一定量的1mol/L的氯化鎂溶液和1mol/L的磷酸氫二鉀溶液,調(diào)節(jié)溶液pH值為8.4。觀察絮凝形成情況,檢測(cè)樣本f2噬菌體的回收率。有機(jī)絮凝法：調(diào)節(jié)二次濃縮模擬水樣的pH值為1.5,2.0,3.0,3.5,4.0,5.0,7.0檢測(cè)不同pH下溶液的濁度及上清和沉淀中f2噬菌體含量,評(píng)價(jià)其濃縮效果。聚乙二醇(PEG)/NaCl法：比較不同濃度PEG8000的濃縮效果的差異(4%、6%、8%、10%、12%、13%、14%、16%、18%、20%(g/100ml))。f2噬菌體濃度的測(cè)定以Ecoil 285為其宿主菌,采用雙層瓊脂平板法進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：NanoCeram濾芯初次濃縮法對(duì)原水中的f2噬菌體回收率為51.63%±26.60%,對(duì)飲用水中的f2噬菌體回收率為50.27%±14.35%。無(wú)機(jī)絮凝法由于洗脫存在一定困難,回收率較低。有機(jī)絮凝法中當(dāng)溶液pH3時(shí),溶液濁度較高,但是f2噬菌體的回收率仍較低(5%)。PEG8000濃度為4%和6%時(shí)f2噬菌體回收率小于3%;當(dāng)濃度達(dá)到8%后,平均回收率可達(dá)70%以上；濃度達(dá)到13%時(shí)回收率最高達(dá)90.09%士10.50%。 結(jié)論：采用NanoCeram濾芯進(jìn)行初次濃縮,聯(lián)合PEG8000/NaCl(13%)法進(jìn)行二次濃縮是一種對(duì)飲用水病毒進(jìn)行濃縮的高效方法。 第二部分熒光定量PCR檢測(cè)腺病毒、輪狀病毒和腸道病毒方法的建立 目的：制備熒光定量PCR檢測(cè)總的人腺病毒(HAdV)、人腺病毒F(HAdVF)、人輪狀病毒A(RVA)和腸道病毒(EV)的標(biāo)準(zhǔn)品,以制備的各病毒重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行各病毒的絕對(duì)定量。 方法：采用MA104細(xì)胞分離嬰兒糞便中人輪狀病毒。提取人腺病毒40DNA,脊髓灰質(zhì)炎病毒1型sabin株和分離的輪狀病毒RNA,并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計(jì)合成HAdV、HAdVF、RVA和EV引物,以提取的人腺病毒血清型40 DNA,脊髓灰質(zhì)炎病毒1型sabin株和分離的輪狀病毒cDNA為模板進(jìn)行梯度PCR優(yōu)化退火溫度,選擇最適退火溫度進(jìn)行普通PCR。膠回收純化各病毒PCR產(chǎn)物,純化后DNA連接入pMD18-T Vector載體,轉(zhuǎn)化入DH5a感受態(tài)細(xì)胞,在LB/氨芐/IPTG/X-Gal平板上進(jìn)行藍(lán)白篩選,LB培養(yǎng)基增殖各陽(yáng)性克隆菌,提取菌液質(zhì)粒,測(cè)序。測(cè)序所得插入片段的堿基序列與模板基因輸入NCBI的BLAST序列類(lèi)似性檢索工具進(jìn)行一致性檢測(cè)。測(cè)定純化質(zhì)粒濃度并換算為拷貝數(shù)濃度,然后以構(gòu)建成功的各病毒標(biāo)準(zhǔn)品建立熒光定量PCR檢測(cè)HAdV、HAdVF、RVA及EV的方法。評(píng)價(jià)各病毒標(biāo)準(zhǔn)品熒光定量PCR的穩(wěn)定性和敏感性。反應(yīng)體系為(20μ1)：模板2μ1,SYBR Green 10μl,上游引物100nm/μ1,下游引物100nm/μl,無(wú)菌水補(bǔ)至20μl。反應(yīng)條件為：50℃2min;95℃10min循環(huán)40次95℃15s,60℃15s,72℃30s,融解曲線：65℃-95℃。采用構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)品定量不同稀釋度的人腺病毒血清型40,脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(Sabin株)及人輪狀病毒A,并比較各稀釋度病毒滴度與拷貝數(shù)濃度的相關(guān)性。 結(jié)果：HAdV、HAdVF、RVA和EV普通PCR最佳退火溫度為60℃,藍(lán)白篩選顯示連接、轉(zhuǎn)化成功,測(cè)序分析顯示各病毒的重組質(zhì)粒中含有各病毒的目的片段。所構(gòu)建的HAdV熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品與目的基因片段(132 bp)一致度為99%；HAdVF標(biāo)準(zhǔn)品與目的基因片段(130 bp)一致度為100%；RVA標(biāo)準(zhǔn)品與目的基因片段(161bp)一致度為100%；EV標(biāo)準(zhǔn)品與目的基因片段(143bp)一致度為99%；各病毒熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建成功,可用于各病毒的絕對(duì)定量。純化后質(zhì)粒濃度分別為1.1×1011拷貝/μ1(HAdV);3.9×1010拷貝／μ1(HAdVF)；9.3×1010拷貝/μ1(EV)6.1×1010拷貝(?)μl(RVA)。不同稀釋度HAdV, HAdVF, RVA和EV(10-108拷貝/反應(yīng)),擴(kuò)增曲線分明,融解曲線呈單峰,且Tm分別為：85.4℃(HAdV),82.6℃(HAdVF),74.8℃(RVA),83.4 (EV),擴(kuò)增效率為89%-99%。各病毒熒光定量PCR反應(yīng)靈敏度為10拷貝／反應(yīng),HAdV稀釋度對(duì)數(shù)值與拷貝數(shù)濃度對(duì)數(shù)值存在線性相關(guān),且R2=0.905。RVA稀釋度對(duì)數(shù)值與拷貝數(shù)濃度對(duì)數(shù)值存在線性相關(guān),且R2=0.986。HAdVF稀釋度對(duì)數(shù)值與拷貝數(shù)濃度對(duì)數(shù)值存在線性相關(guān),且R2=0.998。脊髓灰質(zhì)炎病毒稀釋度對(duì)數(shù)值與拷貝數(shù)濃度對(duì)數(shù)值存在線性相關(guān),且R2=0.967。 結(jié)論：利用制備的HAdV、HAdVF、EV、RVA的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行熒光定量PCR獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有較高的擴(kuò)增效率和良好的線性關(guān)系,且產(chǎn)物特異性好,具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性,該方法可用于對(duì)HAdV、HAdVF、EV和RVA的檢測(cè)。本研究建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HAdV、HAdVF、EV和RVA的線性范圍為10-1.0×108拷貝/μ1,檢測(cè)的靈敏度可達(dá)10拷貝／反應(yīng)體系,能夠用于低濃度樣本的檢測(cè)。熒光定量PCR檢測(cè)HAdV、HAdVF、EV和RVA所得拷貝數(shù)值與稀釋度之間存在高度的相關(guān)性,對(duì)病毒的定量準(zhǔn)確,可靠。 第三部分水廠原水和出廠水中腺病毒、輪狀病毒、腸道病毒的測(cè)定 目的：利用第一部分建立的飲用水中病毒濃縮方法和第二部分建立的HAdV、HAdVF、RVA和EV熒光定量PCR的方法,檢測(cè)武漢市6個(gè)水廠2011年4個(gè)季節(jié)原水和出廠水中HAdV, HAdVF, RVA和EV的污染情況,并對(duì)水廠的處理效果進(jìn)行評(píng)價(jià),探索病毒濃度和其他檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)性。 方法：于2011年1月、4月、7月和10月用NanoCeram濾芯現(xiàn)場(chǎng)濃縮武漢市六家自來(lái)水廠(其中三座水廠以漢江水為水源水,另外三座以長(zhǎng)江水為水源水)原水100L和飲用水200L,同時(shí)測(cè)定原水中pH、溫度、濁度、糞大腸菌群和出廠水中pH、溫度、濁度、游離余氯及糞大腸菌群。飲用水用終濃度為50mg/1 Na2S2O3中和余氯。每個(gè)樣本更換一個(gè)濾芯,將濾芯置于冰盒中低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室,3%牛肉浸膏溶液(pH值為9.5)600m1進(jìn)行洗脫。調(diào)整洗脫液pH值為7.0,采用聚乙二醇(PEG)/NaCl法進(jìn)行二次濃縮,于洗脫液中加入PEG8000(終濃度為13g/100ml),NaCl(1.2g/100ml),完全溶解后4℃靜置3h,10000g,離心30min,沉淀用PBS(pH值為7.0)洗脫,終體積為10ml。提取濃縮液中病毒DNA和RNA,并將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),監(jiān)測(cè)原水和飲水中HAdV、HAdVF. RVA和EV污染狀況,同時(shí)評(píng)價(jià)水廠的水處理效果,探索各病毒濃度、糞大腸菌群及濁度之間的相關(guān)性。評(píng)價(jià)原水和出廠水中可能產(chǎn)生的PCR抑制效應(yīng),及離心和稀釋處理對(duì)降低該效應(yīng)的作用。 結(jié)果：2011年,武漢市六個(gè)自來(lái)水廠水源水和飲用水中HAdV. HAdVF和RVA的陽(yáng)性率均為100%,EV原水中的陽(yáng)性率為46%,飲用水中的陽(yáng)性率為21%。長(zhǎng)江水原水中各病毒濃度范圍如下HAdV:5.54x103拷貝/L-2.20x106拷貝/L; HAdVF:5.69x104拷貝/L-3.76×105拷貝/L；RVA：6.91×103拷貝/L-1.11×105拷貝/L；EV：0～7.95×103拷貝/L。漢江水原水中各病毒濃度范圍為HAdV:2.75x103拷貝/L-1.05×1O6拷貝/L；HAdVF:5.66×102拷貝/L-4.81×104拷貝/L;EV：0-5.56×103拷貝/L；RVA:4.84x103拷貝/L-4.52×104拷貝/L。EV清除率為97%,RVA為82%,HAdV為73%,HAdVF為72%。PCR抑制實(shí)驗(yàn)中冬季原水投加一定量的HAdV標(biāo)準(zhǔn)品,檢出百分比為57.04%,春季原水檢出百分比為61.20%,冬季出廠水為96.46%,春季出廠水為91.07%,原水中PCR抑制作用較嚴(yán)重。比較同一樣本離心前后HAdV濃度變化發(fā)現(xiàn),對(duì)于不同樣本離心前后HAdV濃度在不同程度上均有所增加,增加百分比為29.7%-198.2%(t=10.235,P=0.000)。而同一樣本離心前后RVA濃度變化不明顯(t=1.027,P=0.338)。各樣本DNA稀釋兩倍后稀釋液加標(biāo)回收率較原液加標(biāo)回收率均有不同程度的增加,增加回收率為8.70%～55.90%。RVA cDNA稀釋液加標(biāo)回收率較原液加標(biāo)回收率均有不同程度的增加,增加回收率為6.43%-37.87%。長(zhǎng)江原水HAdV濃度與濁度之間存在一定的正相關(guān),(R2=0.768,P=0.004),漢江原水HAdVF與濁度之間存在一定的正相關(guān)相關(guān),(R2=0.711,P=0.010)。其他病毒濃度與濁度之間的相關(guān)性并未發(fā)現(xiàn)。糞大腸菌群濃度與各病毒濃度之間均不存在明顯的相關(guān)性。RVA長(zhǎng)江水和漢江水含量有差異,長(zhǎng)江中濃度高于漢江(P=0.035)。 結(jié)論：離心和稀釋預(yù)處理是環(huán)境樣本中去除PCR抑制物的有效方法。本研究建立的病毒濃縮方法和熒光定量PCR研究結(jié)果表明,長(zhǎng)江和漢江水原水中存在一定量的HAdV、HAdVF、RVA和EV。在滿(mǎn)足生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的出廠水中仍能檢測(cè)出HAdV、HAdVF、RVA和EV,現(xiàn)有的水處理措施尚不能保證對(duì)病毒的完全去除。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R123.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 鄔曉齡;SiO_2/PVDF復(fù)合納濾膜的制備及其去除模型病毒的性能研究[D];華南理工大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2377142