【摘要】：全谷物食品的健康益處日益受到人們的重視，其推薦攝入標(biāo)準(zhǔn)近年來(lái)持續(xù)被提高，近5年來(lái)，針對(duì)全谷物食品開(kāi)發(fā)出的新型食品，是以前的3倍。全谷物食品中的多酚類物質(zhì)具有顯著的抗氧化活性，能夠清除游離自由基，對(duì)一些腫瘤細(xì)胞具有增殖抑制作用。但是，一直以來(lái)，對(duì)全谷物食品多酚類物質(zhì)的研究，僅注重其游離型多酚的含量，而忽略了同樣在全谷物食品中占有一定比重的結(jié)合型多酚，造成了全谷物食品中多酚類物質(zhì)的含量被嚴(yán)重低估。薏米作為一種具有藥食兩用功效的全谷物食品，在亞洲地區(qū)被廣泛種植，具有很好的抗氧化活性。但目前對(duì)我國(guó)現(xiàn)有薏米品種抗氧化活性和對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用的研究和評(píng)價(jià)，鮮有研究報(bào)道。所以本文以國(guó)內(nèi)常見(jiàn)品種薏米為研究樣本，探討薏米提取物功能成分及其含量測(cè)定，確定薏米提取物體外和細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性，研究薏米提取物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞毒性和增殖抑制作用及其作用機(jī)制，并采取動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)薏米提取物對(duì)高膽固醇膳食大鼠的降血脂作用。 以不同品種薏米為研究對(duì)象，采取不同提取方法，提取出薏米樣品中游離型和結(jié)合型多酚，分別對(duì)其多酚、黃酮、維生素E含量進(jìn)行測(cè)定，，同時(shí)對(duì)薏米提取物中化學(xué)成分預(yù)試，并采用HPLC法掃描測(cè)定分析薏米提取物中的活性成分。其中，結(jié)合型多酚的提取，采用NaOH消化結(jié)合乙酸乙酯萃取法，可將薏米樣品中90%以上的結(jié)合型多酚提取出來(lái)，更加全面的評(píng)價(jià)薏米樣品中的多酚、黃酮含量；采用硼氫化鈉-氯醌比色法測(cè)定總黃酮含量，比較于當(dāng)前國(guó)內(nèi)常用的AlCl3比色法和高效液相色譜法，測(cè)定結(jié)果能夠覆蓋幾乎所有黃酮種類，數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：薏米樣品中結(jié)合型多酚含量接近游離型多酚，結(jié)合型多酚貢獻(xiàn)了總多酚含量的45.28%，結(jié)合型黃酮貢獻(xiàn)了總黃酮含量的71.08%。不同品種間多酚含量差異性較為明顯，總體來(lái)說(shuō)，遼寧5號(hào)薏米品種和龍薏1號(hào)薏米品種，要明顯優(yōu)于貴州黑谷薏米。薏米樣品中生育酚含量和其他谷類作物在同一數(shù)量級(jí)，和小麥生育酚含量相接近。貴州黑谷薏米總生育酚含量最高，達(dá)到14.75±0.62μg/mL，品種間生育酚含量存在顯著性差異（P0.05），且均無(wú)法檢出δ-生育酚。首次對(duì)不同品種薏米樣品進(jìn)行高效液相色譜法掃描分析，結(jié)果表明薏米提取物的HPLC譜圖相似，含有基本相同的特征性成分。游離型多酚提取物的出峰時(shí)間早于結(jié)合型，均在6min左右時(shí)間出峰。薏米提取物HPLC譜圖中峰形均較為復(fù)雜、吸收峰較多，間接證明實(shí)驗(yàn)品種薏米提取物中含有種類豐富的植物活性成分。 以O(shè)RAC值和PSC值為體外抗氧化活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，以CAA值為細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別對(duì)不同品種薏米提取物進(jìn)行抗氧化能力測(cè)定。其中，PSC法較之ORAC方法，既可以測(cè)出水溶性部分抗氧化活性，也能夠測(cè)定出樣品中脂溶性部分的抗氧化活性，結(jié)果更加快速、全面；而細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性實(shí)驗(yàn)（CAA實(shí)驗(yàn)），較之常見(jiàn)的化學(xué)評(píng)價(jià)抗氧化能力方法，因在生物學(xué)層面上建立細(xì)胞培養(yǎng)模型，分析物質(zhì)的抗氧化能力，更有實(shí)際意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：結(jié)合型部分抗氧化能力（ORAC方法和PSC方法）分別貢獻(xiàn)了總抗氧化能力的48.08%和43.64%，證明了在谷類作物薏米樣品中，雖然結(jié)合型多酚因不易被分離提取出，往往被忽視，但其依然能夠表現(xiàn)出接近游離型多酚的抗氧化能力，從而可使薏米的抗氧化能力翻倍。細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性測(cè)定結(jié)果顯示結(jié)合型龍薏1號(hào)薏米的CAA值最大，為1.37±0.48μmol QE/100g薏米樣品（PBS wash）和9.87±1.53μmol QE/100g薏米樣品（noPBS wash），總抗氧化能力最高的亦是龍薏1號(hào)薏米，這和體外化學(xué)評(píng)價(jià)方法相一致。樣品的總抗氧化能力同時(shí)也高度相關(guān)于樣品的總多酚含量（r2=0.935）。但具體到游離型和結(jié)合型各自的抗氧化能力，細(xì)胞評(píng)價(jià)方法與體外化學(xué)評(píng)價(jià)方法不完全相同。 研究薏米提取物對(duì)MCF-10a、MDA-MB-231、MCF-7和HepG2細(xì)胞毒性和抗增殖作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：薏米提取物實(shí)驗(yàn)細(xì)胞存在顯著性品種差異，具有較為明顯的增殖抑制作用，且毒性實(shí)驗(yàn)證明樣品本身毒性。對(duì)于MCF-10a細(xì)胞，薏米樣品總體來(lái)說(shuō)均無(wú)明顯的毒性和增殖抑制作用；.對(duì)于MDA細(xì)胞，薏米品種間對(duì)細(xì)胞株的增殖抑制作用有較大的差異性。游離型遼寧5號(hào)薏米抗增殖作用能力最強(qiáng)（EC50=124.52±10.17mg/mL），顯著高于貴州黑谷和龍薏1號(hào)薏米（P0.05），同時(shí)，未檢測(cè)到MDA-MB-231細(xì)胞的毒性（CC50320mg/mL）；對(duì)于MCF-7細(xì)胞，薏米品種間的差異和抗增殖作用能力與MDA-MB-231細(xì)胞基本相一致；對(duì)于HepG2細(xì)胞，薏米品種具有明顯的增殖抑制作用。 研究了PCNA、p21和CDK4蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞周期循環(huán)的影響。發(fā)現(xiàn)當(dāng)薏米提取物濃度為150mg/mL時(shí)，p21蛋白表達(dá)上升，當(dāng)薏米提取物濃度為180mg/mL時(shí)，與對(duì)照相比，p21蛋白表達(dá)量增加了100%。CDK4蛋白在本實(shí)驗(yàn)中未被明顯檢出。研究證實(shí)薏米提取物能夠顯著下調(diào)PCNA，同時(shí)上調(diào)p21的表達(dá)，表明薏米提取物是通過(guò)DNA聚合酶調(diào)節(jié)因子PCNA和p21介導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)控來(lái)抑制人體肝癌HepG2細(xì)胞的增殖。 研究利用高膽固醇膳食大鼠模型來(lái)評(píng)價(jià)薏米提取物降血脂和抗氧化作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：用高膽固醇飼料飼喂4周的Wistar大鼠，血清中TC含量和LDL-C含量與正常組對(duì)比顯著上升，而體重增重、飼料利用率和肝指數(shù)沒(méi)有明顯變化。薏米提取物可顯著降低高膽固醇膳食大鼠血清中TC和LDL-C含量，并且薏米提取物高劑量組能夠使其恢復(fù)到正常水平，說(shuō)明薏米提取物對(duì)高膽固醇膳食大鼠有降血脂作用，具有臨床意義。另外，與模型組相比，薏米提取物能顯著提高肝臟中CAT和GSH-PX活力和抗氧化能力，顯著降低高膽固醇膳食大鼠血清中MDA含量；薏米提取物中劑量組、高劑量組、游離型多酚組以及結(jié)合型多酚組的抗氧化能力均顯著上升，上升幅度分別為82.89%（P 0.05）、107.52%（P 0.01）、129.25%（P 0.01）、113.64%（P 0.01），證明薏米提取物可顯著提高高膽固醇膳食大鼠血清的抗氧化能力。
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【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：TS210.1;R151

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 周敏;花椒麻素對(duì)肝癌細(xì)胞生理功效及機(jī)理研究[D];西南大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2280015