【摘要】：研究背景狄氏劑屬于有機氯殺蟲劑，，可以對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用。狄氏劑曾經(jīng)在我國廣泛使用，雖然至今已被禁用多年，但由于是一種持久性有機污染物，且有生物富集作用，在環(huán)境、食物和乳汁中仍然可檢測狄氏劑殘留。已有大量研究表明狄氏劑具有生殖毒性及內(nèi)分泌干擾作用，但是，對生命早期低劑量狄氏劑短期暴露可能影響神經(jīng)發(fā)育尚知之甚少。 研究目的在出生后大腦發(fā)育關(guān)鍵期，用不同濃度的低劑量狄氏劑經(jīng)腹腔注射給仔鼠染毒，觀察其一般發(fā)育狀況，海馬神經(jīng)元形態(tài)并分區(qū)計數(shù)神經(jīng)元數(shù)目；WesternBlotting檢測小鼠哺乳期、青春期和成年期海馬突觸相關(guān)蛋白水平，以期探討狄氏劑神經(jīng)發(fā)育毒性作用的細胞學機制。 研究方法ICR小鼠計劃受孕，出生后每窩小鼠經(jīng)調(diào)整為10只后，每窩隨機分為5組，分別為高劑量（20.0μg/kg）、中劑量（2.0μg/kg）和低劑量（0.2μg/kg）三個狄氏劑染毒組及二甲基亞砜（DMSO）溶劑對照組和生理鹽水（NS）對照組。在出生后第三天（PND3）進行腹腔注射（2μl/10g）染毒，隔天1次，連續(xù)6次。實驗期間觀察小鼠的體重、全身絨毛、開眼時間等一般生長發(fā)育指標及可能出現(xiàn)的體征。從PND92天開始，進行6天程序的Morris水迷宮實驗測試小鼠的學習記憶能力。于哺乳期（PND14）、青春期（PND36）和成年期（PND98）分別麻醉、心臟灌注、分離腦組織。左半腦經(jīng)多聚甲醛固定、梯度蔗糖脫水后，冰凍切片（20μm）， 40℃保存，Thionin染色觀察細胞形態(tài)并計數(shù)CA1和CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量。右半腦快速分離海馬， 80℃保存，Western Blotting檢測海馬突觸前膜蛋白Synapsin I和突觸后膜蛋白PSD95水平。 結(jié)果實驗期間小鼠注射部位未出現(xiàn)炎性反應(yīng)，各組小鼠的全身絨毛、活動、神態(tài)等一般生長發(fā)育指標及體重增加未見異常。對成年期小鼠海馬分區(qū)神經(jīng)元計數(shù)發(fā)現(xiàn)，高劑量組雌性小鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對值在青春期就明顯減少，且持續(xù)至成年期；而高劑量組雄性小鼠CA1區(qū)、CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對值則是在成年期出現(xiàn)明顯減少（P0.05）。Morris水迷宮測試發(fā)現(xiàn)，隨著訓練天數(shù)的增加，成年期各劑量組小鼠的登臺潛伏期都明顯縮短，但高劑量狄氏劑染毒組小鼠第五天、第六天的登臺潛伏期有所延長，在24h后探索實驗中，高劑量雌性、雄性小鼠穿越原目標平臺位置的次數(shù)減少（與溶劑對照組比較，皆P0.05）。對突觸標志蛋白的檢測發(fā)現(xiàn)，高劑量組雌性小鼠海馬Synapsin I蛋白水平在哺乳期即明顯下降，到青春期乃至成年期也未顯示恢復；青春期雌性小鼠海馬中PSD95蛋白水平呈現(xiàn)劑量依賴性下降（rPND36=－0.822, P0.05），持續(xù)到成年期（rPND98=－0.743, P0.05）。雄性小鼠各組間海馬Synapsin I蛋白水平無明顯差異，而高劑量組海馬PSD95蛋白水平在發(fā)育各階段（哺乳期、青春期和成年期）均明顯下降。 結(jié)論出生后早期接觸狄氏劑，會損害小鼠成年后的學習記憶能力，影響海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)果及細胞構(gòu)筑，且導致CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目減少；學習記憶能力的下降可能主要因為狄氏劑降低了小鼠海馬突觸蛋白的表達，進而影響突觸聯(lián)系的建立及突觸可塑性。提示早期短期接觸低劑量狄氏劑可能通過持久性損害海馬突觸聯(lián)系的構(gòu)建而影響學習記憶。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【共引文獻】

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本文編號：2228073