本文選題：CHO細(xì)胞微核 + 自動(dòng)化��； 參考：《昆明理工大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：微核實(shí)驗(yàn)是一種以觀察細(xì)胞中微核的形成來(lái)檢測(cè)遺傳毒性的毒理學(xué)分析方法,能經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地檢測(cè)各種理化因子對(duì)細(xì)胞的遺傳損傷,在化合物遺傳毒性檢測(cè)方面發(fā)揮著重要作用。傳統(tǒng)微核實(shí)驗(yàn)耗時(shí)費(fèi)力、檢測(cè)結(jié)果易受主觀因素影響,很難滿足快速、大量檢測(cè)化合物的需要,而基于儀器的微核自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)可以達(dá)到快速、高通量檢測(cè)化合物的遺傳毒性的目的。 本論文選擇了國(guó)內(nèi)外毒理學(xué)檢測(cè)常用的細(xì)胞株之一中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)作為材料,利用流式細(xì)胞儀和激光掃描細(xì)胞儀來(lái)研究體外微核的全自動(dòng)檢測(cè)技術(shù),旨在建立CHO細(xì)胞體外微核的流式細(xì)胞儀自動(dòng)化檢測(cè)方法和激光掃描細(xì)胞儀自動(dòng)化檢測(cè)方法,以達(dá)到快速準(zhǔn)確地進(jìn)行化合物遺傳毒性檢測(cè)的目的。 流式細(xì)胞儀方法利用體外微核分析試劑盒對(duì)染色體斷裂劑環(huán)磷酰胺和非整倍體劑秋水仙堿引起的CHO細(xì)胞微核進(jìn)行了分析和研究,并與傳統(tǒng)的顯微鏡檢測(cè)方法相比較,參考美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)EP9-A文件的方法,對(duì)兩種方法的微核檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行離群值檢驗(yàn)、取值范圍判斷以及回歸分析。研究結(jié)果顯示,流式細(xì)胞儀自動(dòng)化檢測(cè)方法和傳統(tǒng)的顯微鏡檢測(cè)方法具有良好相關(guān)性,由此建立了一種CHO細(xì)胞體外微核的流式細(xì)胞儀自動(dòng)化檢測(cè)方法,為了考察該方法的可靠性和適用性,并將所建立的流式細(xì)胞儀方法應(yīng)用于食品添加劑、化妝品(染發(fā)劑)、藥品、農(nóng)藥、水體、重金屬離子、卷煙煙氣等誘發(fā)的CHO細(xì)胞微核檢測(cè),同時(shí)與傳統(tǒng)的微核顯微鏡檢法相比較分析。結(jié)果表明,二種方法的測(cè)定值無(wú)明顯離群值,相關(guān)性良好,說(shuō)明該方法可以適于食品添加劑、化妝品(染發(fā)劑)、藥品、農(nóng)藥、水體、重金屬離子、卷煙樣品總粒相物誘發(fā)的體外細(xì)胞遺傳損傷的檢測(cè),結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 激光細(xì)胞儀方法結(jié)合細(xì)胞胞質(zhì)分裂阻斷微核技術(shù),采用兩種熒光染料,對(duì)環(huán)磷酰胺(CP)誘導(dǎo)的CHO細(xì)胞微核進(jìn)行了研究,并將該方法與傳統(tǒng)的微核顯微鏡檢法進(jìn)行比較分析,結(jié)果顯示兩種方法的測(cè)定值無(wú)明顯離群值,二者相關(guān)性良好,由此建立了一種CHO細(xì)胞體外微核的激光掃描細(xì)胞儀自動(dòng)化檢測(cè)方法,并利用該方法對(duì)13種不同類型的物質(zhì)處理的CHO細(xì)胞進(jìn)行微核檢測(cè),同時(shí)與顯微鏡方法相比較,研究結(jié)果表明該方法評(píng)價(jià)結(jié)果穩(wěn)定可靠,能夠快速高通量檢測(cè)多種類型的化合物所誘導(dǎo)的微核。 本研究所建立的體外細(xì)胞微核流式細(xì)胞儀方法和激光掃描細(xì)胞儀方法最大的優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快、準(zhǔn)確性高,可適用性強(qiáng),為體外細(xì)胞微核的自動(dòng)化檢測(cè)方法的研究提供參考,同時(shí)也為化合物誘變性的篩選、食品毒理學(xué)檢測(cè)和環(huán)境污染檢測(cè)等提供了快速檢測(cè)方法。
[Abstract]:Micronucleus assay is a toxicological analysis method to detect genotoxicity by observing the formation of micronucleus in cells. It can be used to detect the genetic damage caused by various physical and chemical factors in an economical, simple and accurate way. It plays an important role in the detection of genetic toxicity of compounds. The traditional micronucleus experiment is time-consuming and laborious, and the test results are easily influenced by subjective factors, so it is difficult to meet the needs of rapid and mass detection of compounds. However, the instrument-based micronucleus automated detection technology can achieve rapid results. The aim of this study was to detect the genotoxicity of compounds by high throughput. In this paper, Cho cells, one of the commonly used cell lines of Chinese hamster ovary, were selected as materials. Flow cytometry (FCM) and laser scanning cell analyzer (LSCC) were used to study the automatic detection technique of micronucleus in vitro. The aim of this study was to establish an automatic detection method for in vitro micronucleus of Cho cells by flow cytometry and laser scanning cell analyzer. In order to detect the genotoxicity of compounds quickly and accurately, the micronucleus of Cho cells induced by chromosome breaking agent cyclophosphamide and aneuploidy colchicine was detected by flow cytometry with in vitro micronucleus analysis kit. Has carried on the analysis and the research, Compared with the traditional microscopical methods and referring to the EP9-A document of the National Committee of Clinical Laboratory Standardization, the outlier values, the range of values and the regression analysis of the results of the two methods were tested. The results showed that there was a good correlation between the flow cytometry automated detection method and the traditional microscope detection method, so a flow cytometry automatic detection method for Cho cell micronucleus in vitro was established. In order to investigate the reliability and applicability of the method, the flow cytometry was used to detect the micronucleus of Cho cells induced by food additives, cosmetics (hair dye, drugs, pesticides, water, heavy metal ions, cigarette smoke, etc.) At the same time, it is compared with the traditional micronucleus microscopy. The results show that there is no obvious outlier and the correlation between the two methods is good. The results show that the method is suitable for food additives, cosmetics (hair dye, medicine, pesticide, water, heavy metal ions). The detection of in vitro cell genetic damage induced by total granulocytes in cigarette samples was accurate and reliable. Two kinds of fluorescent dyes were used in combination with cytoplasmic division blocking micronuclear technique. The micronucleus of Cho cells induced by cyclophosphamide (CPN) was studied and compared with the traditional micronucleus microscopy. The results showed that there was no significant outlier between the two methods and there was a good correlation between them. A laser scanning cytometer (LSCC) method was developed to detect the micronucleus of Cho cells in vitro. The method was used to detect the micronuclei of Cho cells treated with 13 different types of substances, and the results were compared with the microscopic method. The results show that the evaluation results of this method are stable and reliable. The method of in vitro micronucleus flow cytometry and laser scanning cytometer was developed to detect micronucleus induced by many kinds of compounds. The advantages of this method are that the method is simple, the detection speed is fast, and the accuracy is high. It provides a reference for the study of automated detection of micronucleus in vitro, as well as a rapid detection method for the screening of mutagenicity of compounds, the detection of food toxicology and the detection of environmental pollution.
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R114

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本文編號(hào)：2003805