本文選題：鉛 + 細(xì)胞遷移　； 參考：《中國職業(yè)醫(yī)學(xué)》2017年02期

【摘要】：目的觀察腦海綿狀血管瘤(CCM)致病基因CCM3基因敲除對醋酸鉛誘導(dǎo)的永生化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)遷移能力的影響,并探討可能的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)機(jī)制。方法以野生型CCM3(CCM3-WT)和基因敲除CCM3(CCM3-KO)HUVECs為實驗細(xì)胞。(1)分別以濃度為0、10、50、200μmol/L醋酸鉛處理2種基因型細(xì)胞24 h后,通過劃痕實驗觀察細(xì)胞遷移情況。(2)取2種基因型細(xì)胞分別采用不同濃度(0、10、50、200μmol/L)醋酸鉛處理24 h和以濃度為50μmol/L醋酸鉛處理0、6、12、24、48 h后,以實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測未折疊蛋白反應(yīng)通路相關(guān)基因的mRNA相對表達(dá)水平,以蛋白免疫印跡法檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)相對表達(dá)水平。(3)取2種基因型細(xì)胞分為鉛染毒組和�；切苋パ跄懰�(TUDCA)組,前者僅予濃度為50μmol/L醋酸鉛處理24 h,后者在采用相同濃度的醋酸鉛染毒前予內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑TUDCA預(yù)處理細(xì)胞,通過劃痕實驗觀察細(xì)胞遷移功能。結(jié)果 (1)CCM3-WT和CCM3-KO細(xì)胞的遷移率均呈隨著醋酸鉛染毒濃度的增加而下降的劑量-效應(yīng)關(guān)系(P0.05)。(2)除10μmol/L組CCM3-KO細(xì)胞GRP78外,10、50和200μmol/L組CCM3-KO細(xì)胞GRP78、蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)、轉(zhuǎn)錄激活因子4(ATF4)和CCAAT區(qū)/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA相對表達(dá)水平均分別高于同劑量組CCM3-WT細(xì)胞(P0.05),且CCM3-KO細(xì)胞PERK和CHOP的mRNA相對表達(dá)水平呈隨著醋酸鉛染毒劑量的增加而增加的時間-效應(yīng)關(guān)系(P0.05);48 h組CCM3-KO細(xì)胞上述4種基因的mRNA相對表達(dá)水平均高于同時間點CCM3-WT細(xì)胞(P0.05)。在醋酸鉛染毒劑量為50μmol/L時,CCM3-KO細(xì)胞GRP78蛋白相對表達(dá)水平高于CCM3-WT細(xì)胞(P0.05),且CCM3-KO細(xì)胞的GRP78蛋白相對表達(dá)水平呈隨著鉛染毒時間的增加而增加的時間-效應(yīng)關(guān)系(P0.05)。(3)TUDCA組細(xì)胞遷移率低于鉛染毒組(P0.05)。結(jié)論醋酸鉛可能通過激活PERK-ATF4-CHOP信號通路啟動ERS,從而降低HUVECs的遷移能力;CCM3對HUVECs遷移能力的降低具有保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of CCM3 knockout on the migration of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by lead acetate, and to explore the possible mechanism of endoplasmic reticulum stress (ERS). Methods the two genotypes were treated with wild type CCM3 CCM3-WT) and knockout CCM3(CCM3-KO)HUVECs as experimental cells. The two genotypic cells were treated with 0.10 渭 mol/L and 50200 渭 mol/L for 24 h, respectively. Cell migration was observed by scratch test.) two genotypic cells were treated with lead acetate at different concentrations for 24 h and 50 渭 mol / L (50 渭 mol / L), respectively, after 48 h treatment with 50 渭 mol/L lead acetate (50 渭 mol/L). Real-time quantitative polymerase chain reaction was used to detect the relative expression level of mRNA in unfolded protein reaction pathway. The relative expression level of glucose-regulated protein 78 (GRP78) was detected by Western blot. The two genotypes were divided into lead exposed group and TUDCA group. The former was treated with 50 渭 mol/L lead acetate for 24 h, and the latter was pretreated with endoplasmic reticulum stress inhibitor (TUDCA) before exposure to the same concentration of lead acetate. The migration function of the cells was observed by scratch test. Results the mobility of CCM3-WT and CCM3-KO cells decreased in a dose-effect relationship with the increase of lead acetate concentration (P 0.05). In addition to 10 渭 mol/L, 10 渭 mol/L and 200 渭 mol/L, CCM3-KO cells GRP78, protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase PERK8, transcriptional activators were found to be responsible for transcriptional activation. The relative mRNA expression levels of ATF4) and CHOP4 (CCAAT region / enhancer protein homologous protein) were higher than those of CCM3-WT cells of the same dose group (P0.05), and the mRNA expression levels of PERK and CHOP in CCM3-KO cells increased with the increase of lead acetate exposure. The mRNA relative expression level of the four genes in CCM3-KO cells was higher than that in CCM3-WT cells at the same time. The relative expression of GRP78 protein in CCM3-KO cells was higher than that in CCM3-WT cells at a dose of 50 渭 mol/L, and the relative expression level of GRP78 protein in CCM3-KO cells increased with the increase of lead exposure time. The transfer rate was lower than that of lead exposure group (P 0.05). Conclusion lead acetate may initiate ERS by activating the PERK-ATF4-CHOP signaling pathway, thus reducing the migration ability of HUVECs. CCM3 has protective effect on the reduction of HUVECs migration.
【作者單位】： 廣州市環(huán)境污染與健康評價重點實驗室中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273097,81472998)
【分類號】：R114

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本文編號：1925702