本文選題：己烯雌酚 + 鄰苯二甲酸二丁酯�。� 參考：《山西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.研究己烯雌酚(DES)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、丙基硫脲嘧啶(PTU)三種類型內(nèi)分泌干擾物對GT1-7神經(jīng)細胞增殖的劑量效應關(guān)系;2.研究DES、DBP、PTU對GT1-7神經(jīng)細胞分泌Gn RH的影響及其聯(lián)合作用;3.研究DES、DBP、PTU聯(lián)合暴露對GT1-7神經(jīng)細胞分泌Gn RH的可能機制。方法:1.采用永生化的下丘腦GT1-7神經(jīng)細胞模型,將三種受試物暴露24h后進行相關(guān)實驗。選擇的受試物及其濃度為:DES為0.1、1、10、100、1000μmol/L,DBP為0.01、1、10、100、1000μmol/L,PTU為0.0001、0.01、1、100、1000μmol/L,聯(lián)合作用的濃度設計為DES 0.1-1000μmol/L,DBP 0.01μmol/L,PTU0.0001μmol/L。2.CCK-8法檢測三種物質(zhì)單獨暴露和聯(lián)合暴露的GT1-7細胞存活率。3.Gn RH放免試劑盒檢測單獨暴露組及聯(lián)合暴露組細胞培養(yǎng)液中Gn RH的分泌量。4.Western Blot檢測聯(lián)合暴露組PLC、GPR54、PKC、Gn RH蛋白表達量。5.RT-PCR檢測暴露組PLC、GPR54、PKC、Gn RH基因表達量。結(jié)果:1.GT1-7細胞單獨暴露于DES時,各染毒組細胞存活率由110%降至4%左右,暴露于DBP時各組細胞存活率由130%降至60%左右,均表現(xiàn)為隨濃度的增大細胞存活率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢。細胞單獨暴露于PTU時,各組的細胞存活率相比對照組有所增加,但基本維持在一定水平120%-135%左右。DES、DBP、PTU單獨作用時,其濃度分別低于10μmol/L、100μmol/L、1000μmol/L時GT1-7細胞存活率在90%以上。而GT1-7細胞單獨暴露于此三種物質(zhì)時對Gn RH的分泌量的影響則表現(xiàn)為隨DES濃度的增大呈現(xiàn)先增加后降低趨勢,對照組2.36μg/ml,染毒組由6.26μg/ml降至2.19μg/ml;隨DBP濃度的增大呈降低趨勢,由對照組2.60μg/ml降至染毒組1.66μg/ml、1.95μg/ml;隨PTU濃度的增大呈先增后降趨勢,對照組2.3μg/ml,染毒組由3.01μg/ml降至1.46μg/ml。2.DES與PTU、DBP與PTU聯(lián)合暴露時,細胞存活率隨濃度增加表現(xiàn)為先增加后降低。相比DES單獨作用體系,0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU同時加入到0-10μmol/L DES后細胞存活率顯著增加,約為126%-160%,具有統(tǒng)計學差異。0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU加入DES中后,Gn RH的分泌量隨DES濃度的增加呈降低趨勢,表現(xiàn)為對照組4.23μg/ml,染毒組0.75μg/ml和1.50μg/ml。3.聯(lián)合暴露時,Kisspeptins/GPR54信號通路上的各濃度組PKC蛋白表達量為1.8和1.3,各濃度組PLC蛋白表達量為1.11和1.14,及DES為0.1μmol/L的GPR54組蛋白表達量為1.1,上述這些蛋白表達量相比對照組都有所增加;而各濃度組Gn RH蛋白表達量為0.9和0.8,及DES為1μmol/L的GPR54組蛋白表達量為0.7,上述蛋白表達量相比對照組減少。而各濃度PKC基因表達量為3.9和2.8,GPR54基因表達量為2.2和1.0,PLC基因表達量為2.1和1.7,上述基因表達量相比對照組都有所增加,Gn RH基因表達量0.8和0.6,相比對照組減少。GPR54、PKC、PLC蛋白和基因表達量基本呈增大趨勢,細胞內(nèi)Gn RH蛋白及其基因表達量的變化趨勢與培養(yǎng)液內(nèi)Gn RH分泌量的變化趨勢基本一致,呈降低趨勢,這與信號通路上幾種主要蛋白表達量的變化呈相反趨勢。結(jié)論:1.DES、DBP、PTU在一定濃度下共同暴露對GT1-7細胞增殖呈現(xiàn)聯(lián)合作用,根據(jù)DES濃度的不同表現(xiàn)為協(xié)同和拮抗效應。當0.01μmol/LDBP、0.0001μmol/L PTU和0-10μmol/L DES聯(lián)合暴露對GT1-7細胞的增殖表現(xiàn)為協(xié)同作用,0.01μmol/L DBP、0.0001μmol/L PTU和100μmol/L DES聯(lián)合暴露則對GT1-7細胞的增殖表現(xiàn)為協(xié)同或相加效應。2.DES、DBP、PTU在一定濃度下共同暴露對GT1-7細胞培養(yǎng)液中的Gn RH分泌呈現(xiàn)聯(lián)合作用,表現(xiàn)為拮抗效應。3.DES、DBP、PTU聯(lián)合暴露時可能促進Kisspeptins/GPR54信號通路上GPR54、PKC、PLC蛋白和基因的表達而抑制Gn RH蛋白和基因的表達,表明Kisspeptins/GPR54信號通路雖然參與了調(diào)控Gn RH分泌的過程,但仍可能還有其他信號通路參與并發(fā)揮主要作用,具體調(diào)控機制以及其他未知的相關(guān)機制還有待于進一步研究。
[Abstract]:The effects of DES , DBP and PTU on the proliferation of GT1 - 7 nerve cells were studied . Compared with the control group , the expression levels of PKC protein were 1.8 and 1.8 , and the expression level of GT1 - 7 cells increased significantly compared with the control group . The combination of DBP and PTU may promote the expression of GPRS 54 , PKC , PLC proteins and genes on the signaling pathway of Kisspephosph/ GPRS 54 to inhibit the expression of Gn RH proteins and genes , suggesting that although the Kisspepsi / GPRS 54 signal pathway is involved in the regulation of the secretion of Gn RH , there may be other signal pathways involved and play a major role , and the specific regulatory mechanism and other unknown relevant mechanisms are still to be further studied .
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳雪山;趙婷;茆廣華;吳向陽;周兆祥;鄒艷敏;鄒燁;Samuel Jerry Cobbina;劉紅陽;仰榴青;;鄰苯二甲酸二辛酯和砷聯(lián)合暴露對小鼠的神經(jīng)毒性及其機制[J];江蘇大學學報(醫(yī)學版);2015年04期

2 陳紅霞;趙明;劉琴;彭開良;;過氯酸銨及碘化鉀聯(lián)合作用對人甲狀腺細胞凋亡及氧化應激的影響[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2015年04期

3 李登輝;張玉敏;馬明月;裴秀叢;段志文;;鄰苯二甲酸二乙基己酯與雙酚A聯(lián)合染毒對大鼠神經(jīng)行為影響研究[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2015年03期

4 王雪金;周云清;羅湘閩;劉瑾;;鄰苯二甲酸二丁酯對雌性大鼠卵巢顆粒細胞分泌功能的影響[J];中國組織工程研究;2014年42期

5 張麗;彭雙清;;青春期的內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡[J];生理科學進展;2014年04期

6 徐曉虹;沈超;周易;秦澤旭;梅成龍;施劍;;增塑劑DEHP的發(fā)育和神經(jīng)毒性研究進展[J];浙江師范大學學報(自然科學版);2013年02期

7 高連連;蔡德培;;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對性分化和性發(fā)育的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2012年08期

8 杜娟;潘紅艷;宮智勇;;己烯雌酚對生殖系統(tǒng)的影響及機制的研究進展[J];中國藥理學與毒理學雜志;2012年04期

9 時國慶;李棟;盧曉s，

本文編號：1919800